1、本研究應(yīng)用RAPD-PCR分子標記手段，研究了來源于福建省三尖杉幾個主要天然分布區(qū)15個三尖杉樣本的遺傳多樣性差異，同時從雙酯堿含量差異方面研究了三尖杉天然群體間雙酯堿含量變異規(guī)律以及從種子形態(tài)性狀方面揭示了三尖杉種子的變異規(guī)律，通過比較三方面的研究結(jié)果來揭示福建省三尖杉的遺傳多樣性。三尖杉樣品分別來自明溪，漳平的馬山和天臺山，柘榮的英山和富溪，以及永泰的嵩口和伏口。試驗篩選了CTAB提取緩沖液，優(yōu)化了提取步驟、提出了樣品采集的最佳季節(jié)

2、和采集的最佳部位，優(yōu)化了PCR技術(shù)體系，篩選出能擴增多態(tài)性片段較多且擴增穩(wěn)定的10條RAPD隨機引物，分別對15個三尖杉個體的基因組DNA進行擴增，對三尖杉的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進行了分析。主要研究結(jié)果如下： 1.針對三尖杉中含有大量的色素、酚類化合物和多糖而導(dǎo)致DNA提取和純化非常困難的現(xiàn)實，通過本論文研究比較，最終確定選用Ⅶ號提取液(100mmol/LTris-Hcl PH 8.0，0.14mol/Lnad，2％CTAB，2

3、0mmol/LEDTA-Na,2％β-巰基乙醇)，經(jīng)過提取步驟的優(yōu)化，比較不同材料提取效果后總結(jié)出5、7、9月的三尖杉幼葉是三尖杉基因組DNA提取的最好材料。 2.通過研究，建立了三尖杉RAPD分析的技術(shù)體系。反應(yīng)終體積是25fl，1×BuffeI。2．5山、M礦2．5mM、dNTPs0．2mM、引物0．61xM、死黿酶1．5U、模板DNA50~、滅菌ddH20 13．9山。PCR循環(huán)程序如下：94℃預(yù)變性5Ⅱlin；94℃變性

4、45s，38℃退火1nlin，72℃延伸1Inin，45個循環(huán)；最后72℃延伸10nlin；4℃結(jié)束擴增。 3.從5個系列100條引物中，篩選出能夠擴增出穩(wěn)定產(chǎn)物、擴增譜帶清晰、特異性強的10條引物供三尖杉遺傳多樣性分析選用。利用篩選出的10個引物和優(yōu)化的RAPD反應(yīng)程序和反應(yīng)體系，對來自福建省內(nèi)6個不同三尖杉居群15個個體進行全面的RAPD分析并得到多態(tài)性，結(jié)果在全部供試資源中共擴增出91條重復(fù)性好、清晰的位點，其中多態(tài)位點共

5、計67個，占73．6％平均每個引物可獲得9．2個位點。 4.聚類結(jié)果表明：當遺傳距離為0．320時15個不同來源的三尖杉優(yōu)樹個體被劃分為四組。第一組為來自漳平馬山和天臺山森林公園的MS．1、MS．2、MS．3、rrS．4、Yrs．5、下rS．6，第二組有來自明溪的MX．1、Mx．2，柘榮英山和富溪的孔．1、zL．2被列入第三組，第四組包括SK-1、SK-2、SK．3、FK．‘l、FK．5。當遺傳距離為0．5340時又被分為兩類，

6、第一類包括第一組、第二組，第二類包括第三組和第四組。從地理何置來看，第一類處于閩西，閩西北，第二類處在福建省的東部或東南部。說明福建省三尖杉優(yōu)樹個體種群劃分在DNA分子水平上只能粗略地劃分為東部和西部兩個種群。但種群何置和地理位置是否真正具有相關(guān)性，還有待將樣品材料增加，材料來源更為豐富后，作進一步的研究。 5.4i同群體間壩酯堿含量存在著極顯著性的差異，其中祀榮富溪群體含量最高為17U．3 u g／g，漳、l，大臺山群體的含量

7、最低為131．4 p魄，雙酯堿含量變異幅度為1．3倍。6個群體雙酯堿含量由高到低依次是：柘榮富溪>柘榮英山>永泰紫山>永泰黃溪>漳平馬山>漳平天臺山。對各群體雙酯堿含量系統(tǒng)聚類進行分析在相似系數(shù)為0．70時可將6個群體分為3組，基本上是地理距離相近的聚為一組。這與分子標記手段得出結(jié)果類似。 6.從相關(guān)系數(shù)來看，在發(fā)芽率與各性狀的相關(guān)性方面三尖杉種子長、寬、厚、長寬比、重、大小、比重等形態(tài)特征與種子發(fā)芽率有一定的正相關(guān)，特別是種子