1、牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis，M.bovis）是引起牛結(jié)核病的主要病原，給當(dāng)今養(yǎng)牛業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)壓力，同時(shí)作為一種人獸共患病，牛結(jié)核病也給人類的生命健康帶來了巨大的威脅。M.bovis主要通過呼吸道感染宿主，能夠引起機(jī)體的慢性炎癥性反應(yīng)。BCG是M.bovis的傳代致弱菌株，具有很好的免疫原性，是預(yù)防人結(jié)核病唯一的疫苗。IL-17主要由Th17細(xì)胞分泌產(chǎn)生，在炎癥性反應(yīng)和抗微生物感染過程中具有重要作用，而在M.

2、bovis感染過程中的作用還不是很清楚。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究表明M.bovis可以通過樹突狀細(xì)胞作用于CD4+T細(xì)胞引起IL-17的表達(dá)上調(diào)，而BCG誘導(dǎo)IL-17表達(dá)能力卻較弱。本研究旨在利用建立的小鼠模型來證實(shí)IL-17與Th17細(xì)胞在M.bovis感染中的作用。主要結(jié)果如下:
　　(1) TGF-β，IL-6，IL-1β，IL-23是誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵性細(xì)胞因子，本實(shí)驗(yàn)將M.bovis和BCG以感染比MOI(10∶1)

3、感染小鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞，24小時(shí)后對被感染細(xì)胞中誘導(dǎo)Th17分化的關(guān)鍵細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn):TGF-β，IL-6，IL-1β，IL-23四個(gè)基因在mRNA水平上的表達(dá)顯著上調(diào)，且M.bovis的誘導(dǎo)作用顯著強(qiáng)于BCG。
　　(2) ROR-γt是Th17細(xì)胞的特征性轉(zhuǎn)錄因子，IL-17是Th17細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子。本實(shí)驗(yàn)將M.bovis和BCG感染后的樹突狀細(xì)胞分別和幼稚CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)，24小時(shí)之

4、后對培養(yǎng)后的細(xì)胞中ROR-γt，IL-17，TGF-β，IL-6，IL-1β，IL-23六個(gè)基因mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn):ROR-γt，IL-17，TGF-β，IL-6，IL-1β，IL-23六個(gè)基因在mRNA的表達(dá)水平顯著上調(diào)，且M.bovis的誘導(dǎo)作用顯著強(qiáng)于BCG。通過兩個(gè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)推測M.bovis和BCG能夠通過上調(diào)TGF-β，IL-6，IL-Iβ，IL-23的表達(dá)來誘導(dǎo)Th17的分化，且M.bovis的誘導(dǎo)作用顯著

5、強(qiáng)于BCG。
　　(3)將培養(yǎng)至對數(shù)期的M.bovis和BCG菌株通過尾靜脈以2×105CFU/只注射至小鼠體內(nèi)，分別在感染的第1，4，7，14，21，28，35，42，49，56天稱重和撲殺小鼠，對小鼠體重及病理變化進(jìn)行了檢測和分析。感染后的小鼠體重出現(xiàn)不同程度的下降且M.bovis的下降更明顯。感染菌株能夠引起小鼠組織病理學(xué)反應(yīng):M.bovis可以引起小鼠肺臟肺泡壁增厚，巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤，甚至在21天的時(shí)候可以看到典型的

6、結(jié)核結(jié)節(jié)出現(xiàn)，而BCG也可以引起相似的炎癥性反應(yīng)但是癥狀較輕。M.bovis對脾臟的影響主要表現(xiàn)為巨噬細(xì)胞增多，淋巴細(xì)胞減少和紅髓區(qū)淤血導(dǎo)致水腫，而BCG組的癥狀較輕。結(jié)果表明M.bovis和BCG通過尾靜脈注射感染小鼠的動物模型構(gòu)建成功。
　　(4)對感染不同時(shí)間點(diǎn)小鼠脾臟和肺臟中的Th17及IL-17的表達(dá)進(jìn)行了分析。結(jié)果表明強(qiáng)弱菌株均能夠引起脾臟和肺臟中Th17和IL-17的上調(diào)，且IL-17的上調(diào)時(shí)間早于Th17。另外肺臟

7、中IL-17和脾臟相比上調(diào)時(shí)間更早，持續(xù)時(shí)間更長。
　　(5)通過免疫組化對小鼠脾臟和肺臟中IL-17的分布特點(diǎn)進(jìn)行了的分析。結(jié)果表明強(qiáng)弱菌株誘導(dǎo)的IL-17主要集中在脾臟的紅髓區(qū)、脾小梁以及被膜下，且M.bovis誘導(dǎo)IL-17的表達(dá)高于BCG，而肺臟中IL-17的表達(dá)較少，且主要集中在肺泡內(nèi)，肺血管和肺氣管中。
　　綜上所述，本研究證實(shí)M.bovis和BCG感染小鼠誘導(dǎo)了Th17分化及IL-17的表達(dá)，且M.bovis誘