1、第一部分 Th17和Tc17細胞亞群及其細胞因子白介素17在哮喘小鼠動物模型中的表達研究
　　 目的:探討輔助性T細胞17（Th17）和CD8+IL-17+細胞（Tc17）在支氣管哮喘小鼠中的比例變化及其意義。
　　 方法:24只BABL/c 小鼠隨機分成兩組：哮喘組和正常對照組，每組12只，用卵蛋白（OVA）致敏和激發(fā)的方法建立小鼠哮喘模型。然后用流式細胞術檢測脾臟單個核細胞中Th17細胞和Tc17細胞所占的百分比；用

2、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測支氣管肺泡灌洗液中細胞因子IL-17的水平；雙標免疫熒光檢測肺組織中Th17細胞和Tc17細胞的表達。
　　 結果:哮喘組肺組織炎癥改變明顯；哮喘組脾臟細胞中Th17細胞比例顯著高于對照組，Tc17細胞比例也顯著高于對照組；哮喘組BALF中IL-17 水平顯著高于正常對照組；哮喘組BAL中細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞數(shù)目明顯高于對照組)；肺組織免疫熒光結果示Th17細胞和Tc17細胞在哮喘小鼠的肺部有

3、表達，主要分布在支氣管周圍和血管周圍，并且數(shù)量明顯高于對照組。
　　 結論:哮喘小鼠的Th17細胞和Tc17細胞數(shù)量增多，并且分泌的細胞因子IL-17水平升高，而且哮喘小鼠肺部有較多的Th17細胞和Tc17細胞浸潤，提示Th17細胞和Tc17細胞可能參與了哮喘的發(fā)病機制。
　　 第二部分 Toll 樣受體2 信號對小鼠淋巴瘤EL4細胞系表達白細胞介素（IL）-17 影響的研究
　　 目的:探討TLR2 信號通路對

4、小鼠淋巴瘤細胞系EL4細胞表達分泌IL-17A的影響。
　　 方法:用ELISA 法檢測各組細胞上清液中IL-17A表達水平，實時熒光定量RT-PCR法檢測各組細胞中RORγt和IL-17A的mRNA的表達水平變化。
　　 結果:TLR2 配體可以顯著增加細胞IL-17A和RORγt和IL-17A的mRNA的表達，而TLR2 抗體可以將這種促進作用抵消一部分，TLR2 配體刺激后細胞上清中IL-17A蛋白水平也明顯升高。

5、
　　 結論：Toll 樣受體2 信號對小鼠淋巴瘤EL4細胞系表達IL-17是起促進作用的，這種作用可能是通過促進轉錄因子 RORγt的表達來實現(xiàn)的。
　　 第三部分 Toll 樣受體2 信號激活對Th17細胞分化和功能的影響研究
　　 目的:探討Toll 樣受體2 信號在調節(jié)Th17細胞的分化和功能方面的作用，并且初步探討參與調控的信號通路機制。
　　 方法:制作小鼠哮喘模型，免疫磁珠分選CD4+T細胞

6、經(jīng)體外誘導分化成Th17細胞，細胞分為四組：（1）空白對照組，（2）用TLR2的配體（LTA）激活TLR2 信號組，（3）TLR2的抗體阻斷TLR2 信號組，（4）RORc基因的干擾慢病毒組。然后MTT 法檢測各組的細胞增殖情況，流式細胞儀檢測各組胞內因子IL-17A的水平，ELISA 檢測各組的細胞上清液中的IL-17A 蛋白水平，Real-time RT-PCR檢測各組的Th17 相關細胞因子（IL-17A、IL-17F和IL-22

7、）的mRNA 水平，并檢測轉錄因子RORγt的mRNA水平的變化。
　　 結果:
　　 （1）MTT 檢測結果示，LTA、LTA+TLR2 抗體和LTA+慢病毒都能增加Th17細胞的增殖，與空白對照組比較，P 值的大小分別為P＜0.05，P＜0.001和 P＜0.01。
　　 （2）實時熒光定量PCR結果表明慢病毒感染細胞后可使RORc的mRNA 水平下降86％，各組的Th17 相關基因mRNA 水平檢測，LTA

8、組引起IL-17A、IL-17F和IL-22的mRNA 水平明顯升高，LTA+TLR2 抗體組和LTA+慢病毒組上述升高效應又被逆轉。
　　 （3）蛋白水平檢測胞內因子染色流式分析LTA 可以明顯刺激增加IL-17A+細胞的百分比，IL-17A+CD8-％由11.7％增加到22.5％。ELISA 檢測細胞上清中的IL-17A 結果為LTA組引起IL-17A 蛋白水平增高，而LTA+TLR2 抗體組和LTA+慢病毒組蛋白水平又下降

9、。
　　 （4）TLR2 信號對轉錄因子RORγt mRNA 水平的影響：LTA組的RORγt mRNA 水平明顯增高。
　　 結論:TLR2 信號能促進Th17細胞的增殖，能增強Th17細胞的功能，并且是通過增加特異性的轉錄因子RORγt的表達來實現(xiàn)的。
　　 第四部分支氣管哮喘患者的血漿IL-21和總IgE 水平及其相關性研究
　　 目的:探討白介素-21（IL-21）和總IgE在支氣管哮喘發(fā)病時的血

10、清水平及其兩者相關性。
　　 方法:隨機收集哮喘急性發(fā)作期患者38例（急性發(fā)作組），哮喘緩解期患者23例（緩解組）和健康者19例（對照組）血清，用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清IL-21和總IgE 水平。
　　 結果:哮喘急性發(fā)作期患者血清IL-21 水平明顯高于正常對照組，急性發(fā)作期IL-21 明顯高于緩解期組，而緩解期和正常對照組差異無統(tǒng)計學意義。血清總IgE 水平哮喘急性發(fā)作期和緩解期均明顯高于正常對照組。哮喘