1、　　目的 比較免疫層析法(Immununochromatographic Test,ICT)、酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)和免疫斑點法(Dlot Immunobinding Assay,DIBA)檢測登革DV-IgM/IgG抗體的敏感性、特異性及其他優(yōu)缺點。
　　建立疑似登革病毒感染的病原快速鑒定分型方法,對廣州市區(qū)2003年仲夏一批疑似登革病毒感染患者進行確診,

2、并從基因水平分析該流行株的可能來源。
　　方法 用ICT法、ELISA法和DIBA法同時檢測明確診斷為登革熱和流行性出血熱、瘧疾、乙腦、流感、鉤體等其他發(fā)熱患者標本的DV-IgM/IgG抗體,比較測試結(jié)果。
　　用ICT法檢測2003年廣州地區(qū)早期疑似患者的DV-IgM,DIBA法檢測DV-IgG抗體；同時用細胞培養(yǎng)病毒分離、逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性分析(Reverse Transcriptase-Poly

3、merase Chain Reaction-RestrictionFragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)技術(shù)分別進行病原的分離和鑒定；并對所分離到的毒株進行基因克隆、測序,并與國際參考株及國內(nèi)流行株相應的序列進行同源性分析,結(jié)合患者的流行病學資料推測本次流行株的可能來源。
　　結(jié)果 用ICT法(澳大利亞PANBIO Limited)檢測登革熱患者DV-IgM的陽性率為60.4%(32/5

4、3),DV-IgG無一例陽性；檢測非登革感染發(fā)熱患者DV-IgM的假陽性率為14.7%(5/53),DV-IgG無一例陽性。用ELISA法(德國GMBH)檢測登革熱患者DV-IgM的陽性率為66.0%(35/53),DV-IgG的陽性率為70.2%(40/57)；檢測非登革感染發(fā)熱患者DV-IgM的假陽性率為35.3%(12/53),DV-IgG的假陽性率為8.8%(3/57)。用ELISA法(澳大利亞PANBIO Limited)檢測

5、登革熱患者DV-IgM的陽性率為75.5%(40/53),DV-IgG的陽性率為49.1%(28/57)；檢測非登革感染發(fā)熱患者DV-IgM的假陽性率為11.8%(4/53),DV-IgG無一例陽性。用DIBA法(新加坡Genelabs Diagnostics)檢測登革熱患者DV-IgM的陽性率為84.9%(45/53),DV-IgG的陽性率為64.9%(37/57)：檢測非登革感染發(fā)2003年廣州地區(qū)登革病毒感染快速診斷及可能來源分析

6、摘要熱患者DV一IgM的假陽性率為47.0%(16/53),Dv一IgG無一例陽性。 2003年廣州地區(qū)疑似發(fā)病患者發(fā)病5天內(nèi)血標本DV一工gM抗體陽性率為56.5%(13/23),Dv一IgG抗體陽性率為2一7%(5/23)；發(fā)病5一10天血標本Dv一IgM抗體陽性率為66.7%(16/24),DV一IgG抗體陽性率為70.8%(17/24)。從18份發(fā)病5天內(nèi)患者的血標本中分離病毒7份,GD29/2003廣東流行株經(jīng)間接免疫熒光檢測

7、以及RT一PCR一RFLP和基因測序檢測證實為DVI感染；用RT一PCR檢測30份早期患者血標本,患者的陽性率為83.3%(25/30),其中DV一IgM(一)患者的陽性率為93.8%(15/16),DV一IgM(+)患者的陽性率為71.4%(10/14)；基因序列分析分析表明,GD29/2003廣東流行株與登革I型病毒柬埔寨流行株及我國97、99年登革I型病毒流行株的同源性最高,分別為97%、97%、98%。所有患者在發(fā)病前兩個月均在

8、廣州市區(qū)某大院內(nèi)居住,無輸血史、無外出史。結(jié)論通過比較顯示,工CT法檢測DV一IgM抗體具有快速敏感、操作簡便的優(yōu)點,可單人份操作,不需要特殊設備,適合在登革熱暴發(fā)流行期間用作疫區(qū)基層醫(yī)療單位的早期初篩試驗；ELISA法檢測DV一工gM/IgG抗體的敏感性和特異性較強,且檢測成本較低,適合在普查及大批量標本檢測時使用；DIBA法檢測Dv一工gM抗體的敏感性較強,容易判讀結(jié)果,但操作繁瑣、成本昂貴,不適合作為初篩試驗；DIBA法檢測Dv一

9、IgG抗體的敏感性和特異性高,可避免敏感性不高的方法造成的漏檢,與其他黃病毒屬病毒和某些蟲媒傳染病之間的非特異性反應很少,可排除干擾因素影響,適合在登革熱散發(fā)期間使用,可作為登革病毒感染的確證實驗。 利用RT一PCR一RFLP技術(shù)對登革病毒進行分型具有敏感、特異、快速的優(yōu)點,與DV抗體檢測結(jié)合起來應用可有效縮短疑似DV感染的確診時間、降低檢測成本,具有很好的社會效益和經(jīng)濟效益。2003年廣州登革熱流行為登革I型病毒感染所致,推測廣東可能