1、單倍體育種作為一種高效育種方法，在油菜育種中已越來(lái)越受到關(guān)注。在油菜單倍體產(chǎn)生的各種途徑中，花粉培養(yǎng)(也稱(chēng)小孢子培養(yǎng))是目前獲取單倍體最有效、最廣泛應(yīng)用的方法。但是，目前我國(guó)甘藍(lán)型(半)冬油菜小孢子培養(yǎng)的低胚狀體誘導(dǎo)頻率、低染色體加倍率，以及油菜的生育期，限制了該技術(shù)在我國(guó)油菜遺傳育種和基礎(chǔ)研究中的進(jìn)一步應(yīng)用。本試驗(yàn)第一部分以2004～2006年種植在大田條件下的甘藍(lán)型(半)冬油菜為試驗(yàn)材料，考察了大田生長(zhǎng)條件下甘藍(lán)型油菜小孢子培養(yǎng)的胚

2、胎發(fā)生，胚狀體成苗、快繁和生根培養(yǎng)，以及利用除草劑進(jìn)行小孢子染色體加倍的情況，選出了重慶氣候條件下甘藍(lán)型油菜小孢子培養(yǎng)胚狀體高頻發(fā)生的多個(gè)材料，為進(jìn)一步利用小孢子培養(yǎng)開(kāi)展單倍體育種和基礎(chǔ)研究奠定了良好基礎(chǔ)；首次試驗(yàn)了抗微管除草劑施田補(bǔ)對(duì)甘藍(lán)型油菜小孢子植株的加倍效果，發(fā)現(xiàn)施田補(bǔ)是一種有效的染色體加倍藥劑，并初步確定了利用除草劑進(jìn)行小孢子植株染色體加倍的方法。第二部分開(kāi)展了甘藍(lán)型油菜無(wú)土栽培營(yíng)養(yǎng)液的篩選和優(yōu)化、人工春化時(shí)期和時(shí)間的確定以及

3、人工春化后溫室內(nèi)無(wú)土栽培甘藍(lán)型油菜的小孢子培養(yǎng)研究，初步建立了甘藍(lán)型(半)冬油菜常年小孢子培養(yǎng)技術(shù)。 本試驗(yàn)得到了以下主要結(jié)論：1.2004～2006年連續(xù)三年從大田生長(zhǎng)條件下選取49份甘藍(lán)型油菜品系(種)進(jìn)行小孢子培養(yǎng)，選出了重慶氣候條件下小孢子培養(yǎng)胚狀體高頻發(fā)生的材料11份：04K85(5.58個(gè)/蕾)、04SH378(1.06個(gè)/蕾)、04SH385(1.10個(gè)/蕾)、04H1126(1.67個(gè)/蕾)、04H1035(12

4、.71個(gè)/蕾)、05X19(2.30個(gè)/蕾)、05X5(2.30個(gè)/蕾)、06K99(19.63個(gè)/蕾)、06R22(11.83個(gè)/蕾)、06P313(1.39個(gè)/蕾)和06K076(8.84個(gè)/蕾)，對(duì)于油菜單倍體育種和基礎(chǔ)研究有重要意義；同時(shí)進(jìn)一步驗(yàn)證了甘藍(lán)型油菜小孢子培養(yǎng)的基因型差異以及取材時(shí)間對(duì)小孢子培養(yǎng)胚胎發(fā)生能力的影響，確定了適于大多數(shù)甘藍(lán)型油菜小孢子培養(yǎng)胚胎發(fā)生的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為6.0。 2.在同等培養(yǎng)條件下，

5、不同材料小孢子培養(yǎng)胚狀體的成苗率存在差異；在相同培養(yǎng)條件下，不同基因型花粉植株無(wú)性系的生根率不同。 3.利用光照培養(yǎng)箱對(duì)甘藍(lán)型油菜小孢子培養(yǎng)花粉植株試管苗進(jìn)行低溫春化，當(dāng)春化溫度為5～8℃，光照時(shí)間16h/d，光照強(qiáng)度約3，0001x，春化時(shí)間為40d時(shí)，大多數(shù)基因型的小孢子培養(yǎng)再生試管苗移栽后能現(xiàn)蕾開(kāi)花。 4.甘藍(lán)型油菜花粉植株不同無(wú)性系之間，單倍體自然加倍率存在很大差異。 5.首次試驗(yàn)了抗微管除草劑施田補(bǔ)對(duì)甘

6、藍(lán)型油菜小孢子植株的加倍效果，發(fā)現(xiàn)施田補(bǔ)是一種有效的染色體加倍藥劑。總的來(lái)看，用施田補(bǔ)溶液浸根和點(diǎn)滴生長(zhǎng)點(diǎn)處理，植株的加倍效率高于用含50mg.L-1秋水仙堿溶液浸根處理的加倍效率。方差分析結(jié)果表明，各種加倍處理方法之間(用秋水仙堿和施田補(bǔ)溶液浸根和用不同濃度的施田補(bǔ)溶液點(diǎn)滴植株生長(zhǎng)點(diǎn))以及不同材料之間的植株加倍效率差異都不顯著。在實(shí)際操作中，最好用含0.00625﹪施田補(bǔ)的B5溶液浸根處理3d，進(jìn)行甘藍(lán)型油菜小孢子培養(yǎng)花粉植株染色體加

7、倍。方差分析和多重比較結(jié)果表明，不同基因型的花粉植株無(wú)性系采用浸根處理進(jìn)行染色體加倍，染色體加倍效率不同。 6.在本試驗(yàn)條件下，就與小孢子培養(yǎng)有關(guān)的植株農(nóng)藝性狀(一次有效分枝數(shù)、全株有效角果數(shù)和主序有效角果數(shù))而言，水培油菜采用改良的潘寧斯菲德?tīng)I(yíng)養(yǎng)液四效果最好。 7.利用光照培養(yǎng)箱進(jìn)行甘藍(lán)型(半)冬性油菜人工低溫春化，在春化溫度為6～8℃，光照時(shí)間16h/d，光照強(qiáng)度約3，0001x的條件下，三葉期～五葉期春化比種子萌動(dòng)