1、目的:研究喹啉酸 (quinolinic acid，QUIN)對原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元的作用及其影響因素，為開發(fā)新的神經(jīng)保護(hù)劑尋找可能的靶點。 方法:以形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、免疫組織化學(xué)、高效液相色譜、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察等方法和技術(shù)研究QUIN和N9小膠質(zhì)細(xì)胞株培養(yǎng)液(N9 microglial cell line medium，MCLM)單用和聯(lián)合使用對原代培養(yǎng)的小鼠大腦皮層神經(jīng)元的生長、活度、完整性等的作用，分析這些作用與興

2、奮性氨基酸及其受體、細(xì)胞因子、細(xì)胞內(nèi)鈣和氧化應(yīng)激的關(guān)系。 結(jié)果: 1、不同濃度的QUIN單用對皮層神經(jīng)元的作用有顯著質(zhì)的差異。低濃度(10 和100 μmol/L)有利于神經(jīng)元生長，使樹突和觸突更豐富，突起間網(wǎng)絡(luò)更明顯，MTT值較對照組升高，神經(jīng)元LDH漏出量降低；500 μmol/L 和 1 mmol/IL QUIN 對神經(jīng)元形態(tài)、活度和完整性無明顯影響；高濃度QUIN (3和5 mmol/L)呈濃度依賴性損傷神經(jīng)元，

3、顯示胞體腫脹，失去折光性，細(xì)胞膜破裂，神經(jīng)元數(shù)目減少，MTT值明顯降低， LDH漏出量明顯升高。 2、MCLM 單用呈濃度和時間依賴性損傷神經(jīng)元。以1:1稀釋度的MCLM 作用最明顯；作用 3 h 神經(jīng)元形態(tài)、數(shù)量、活性和完整性己開始出現(xiàn)明顯病理變化。1:30 稀釋度的MCLM對神經(jīng)元形態(tài)、數(shù)量、活性和完整性均無明顯影響。 3、1:30稀釋度的 MCLM 與 QUIN 合用增強(qiáng)后者對神經(jīng)元的損傷作用。顯示取消了低濃度QU

4、IN (10和100 μmol/L)對神經(jīng)元生長的有益影響，甚至使500 μmol/L 和1 mmol/L的QUIN出現(xiàn)明顯毒性作用。 4、AP-5和DNQX預(yù)先加入不影響10 μmol/L QUIN 對神經(jīng)元生長的有益作用；但AP-5預(yù)先加入明顯降低5 mmol/L QUIN 及1:30 MCLM與1 mmol/L QUIN 聯(lián)用對神經(jīng)元的損傷作用，而DNQX預(yù)先加入無此明顯作用。 5、5 mmol/L QUIN 及

5、1:30 MCLM 與1 mmol/L QUIN 聯(lián)用使神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10 水平，氨基酸Glu、Asp含量，MDA水平及細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度升高，SOD活性降低，而IL-6水平變化不大；AP-5預(yù)先加入能顯著阻遏上述指標(biāo)的變化，而DNQX預(yù)先加入除顯著阻遏神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣增加外，對其它指標(biāo)無明顯影響。 結(jié)論: 1．QUIN 對離體培養(yǎng)神經(jīng)元有雙向作用，即低濃度 (10 和 100μmol/

6、L)有益于神經(jīng)元生長，而高濃度(≥3 mmo/L)對神經(jīng)元有顯著損傷作用。 2．小膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)元的損傷過程中起著重要作用。其分泌物能損傷神經(jīng)細(xì)胞，也增強(qiáng)QUIN對神經(jīng)細(xì)胞的損傷作用。 3．高濃度QUIN (5 mmol/L)及中濃度QUIN (1 mmol/L)與低濃度MCLM(1:30)合用對神經(jīng)元的損傷機(jī)制部分與NMDA受體激動有關(guān)，也與興奮性氨基酸釋放，細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β分泌增多，鈣超載和氧化應(yīng)激反應(yīng)