1、本論文分兩部分介紹：第一部分:腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥是導(dǎo)致腫瘤臨床化療失敗的主要原因之一,耐藥腫瘤細(xì)胞通常會(huì)對(duì)許多化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的抗腫瘤藥物產(chǎn)生交叉耐藥,最終導(dǎo)致藥物療效降低甚至失去治療作用。因此開發(fā)有效的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑是克服腫瘤耐藥、提高化療效果的重要手段,也一直是國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。迄今為止,多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑,主要是P—gp逆轉(zhuǎn)劑已經(jīng)發(fā)展到了第三代。
　　 Sinenxans(A,B,C和yunanxane)是本課題組從紅豆

2、杉屬植物愈傷組織及細(xì)胞培養(yǎng)物Ts-19中分離得到的一類新型紫杉烷類化合物,具有紫杉烷獨(dú)特的6/8/6元母核結(jié)構(gòu),含量高達(dá)培養(yǎng)物干重的2～5％(w/w)。前期研究發(fā)現(xiàn),這類化合物具有較強(qiáng)的腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)活性,且來(lái)源易得,不受自然資源限制,可望由此出發(fā)通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾與改造發(fā)現(xiàn)活性更強(qiáng)、低毒、具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型紫杉烷類多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑。
　　 在之前的工作中,我們從sinenxan A(SIA)出發(fā),通過(guò)結(jié)構(gòu)改造獲得一系列新化合物,

3、得到了兩個(gè)對(duì)腫瘤MDR細(xì)胞逆轉(zhuǎn)活性較強(qiáng)化合物,Sy1220和NPB-14。在此基礎(chǔ)上,為尋找逆轉(zhuǎn)活性更強(qiáng)的化合物,本論文采用酶-化學(xué)法,通過(guò)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)對(duì)sinenxans進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,合成了兩種不同類型的紫杉烷類似物(sinenxans和taxinine系列)。
　　 分別以9α-羥基-SIA、10β-去乙酰-SIA、5α-去乙酰-SIA和14β-去乙酰-SIA；2α,14β-二乙酰氧基-5α-羥基-10β-甲氧基-4(20),1

4、1-紫杉二烯、2α,5α-二乙酰氧基-14β-羥基-10β-甲氧基-4(20),11-紫杉二烯、2α-乙酰氧基-5α-羥基-10β-甲氧基-13-羰基-4(20),11-紫杉二烯以及10β-去乙酰-sinenxan C8個(gè)紫杉烷類化合物為原料,依據(jù)藥物構(gòu)效關(guān)系原則設(shè)計(jì)了五條主要的路線,重點(diǎn)對(duì)SIA的9α位和5α位進(jìn)行衍生化修飾,共合成95個(gè)目標(biāo)化合物,結(jié)構(gòu)經(jīng)1D NMR(1H NMR、13C NMR)和(HR-)ESI-MS確證,并對(duì)這

5、些化合物進(jìn)行了體外逆轉(zhuǎn)活性評(píng)價(jià),測(cè)得所有化合物作為多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑聯(lián)合紫杉醇使用時(shí)紫杉醇對(duì)A549/Taxol、MCF-7/DOX和MX-1/Taxol三種耐藥細(xì)胞株抑制增殖作用。藥理活性結(jié)果表明:31個(gè)衍生物逆轉(zhuǎn)活性較強(qiáng),其中23個(gè)衍生物顯著強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照藥維拉帕米。
　　 在此基礎(chǔ)上,分析了衍生物結(jié)構(gòu)及其藥理活性并初步總結(jié)了構(gòu)效關(guān)系:1)9α-OH-SIA的衍生物中,絕大部分具有很強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)活性;2)5α-OH衍生物逆轉(zhuǎn)活性較弱；

6、3)10β-OMe取代的紫杉烷類化合物多數(shù)具有較強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)活性；4)14β-OH衍生物逆轉(zhuǎn)活性較5α-OH衍生物強(qiáng),但仍不及9α-OH衍生物；5)10β-去乙酰-SIC的衍生物逆轉(zhuǎn)活性不佳。
　　 上述結(jié)果為紫杉烷類化合物的進(jìn)一步結(jié)構(gòu)優(yōu)化及藥物候選物的確定奠定了基礎(chǔ)。
　　 第二部分
　　 為制備第一部分所需的原料Sinertxans(A,B,C和yunanxane),將中國(guó)紅豆杉細(xì)胞系Ts—19愈傷組織(5 kg

7、)經(jīng)乙醚回流提取后,進(jìn)一步利用乙醇冷浸提取。運(yùn)用硅膠柱色譜結(jié)合高效液相色譜的方法,對(duì)提取物進(jìn)行了反復(fù)分離純化。除得到實(shí)驗(yàn)所需的原料Sinenxans(A,B,C和yunanxane,6-9)外,還從中分離得到五個(gè)微量的紫杉烷類化合物(1-5),其中1-4為新化合物。并運(yùn)用現(xiàn)代波譜技術(shù)(IR,ESI-MS,1H-NMR,13C-NMR,gCOSY及HSQC)對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定,確定了新化合物的結(jié)構(gòu)為5α—hydroxy-2α,10β-di

8、acetoxy-14β-(3-hydroxy-2-methyl-butyryl)oxytaxa-4(20).11-diene(1),2α,5α,10β-triacetoxy-14β(2-hydroxy-propionyl)oxytaxa-4(20),11-diene(2),2α,5α,10β-triacetoxy-14β-(2-hydroxy-3-methyl-butyryl)oxytaxa-4(20),11-diene(3),和2α-

9、benzoxy-4α,9α,10β,13α-tetraacetoxytax-11-erie(4)。對(duì)化合物1-5進(jìn)行了藥理學(xué)活性評(píng)價(jià),包括對(duì)五種人癌細(xì)胞株(HCT-8,Bel-7402,BGC-823,A549 and A2780)進(jìn)行細(xì)胞毒活性評(píng)價(jià),和對(duì)腫瘤耐藥細(xì)胞株A549/taxol進(jìn)行了腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)活性評(píng)價(jià)。結(jié)果表明:化合物1-5均無(wú)明顯的細(xì)胞毒活性,但是對(duì)腫瘤耐藥細(xì)胞株都具有一定的逆轉(zhuǎn)活性,特別是化合物4表現(xiàn)出較強(qiáng)的MDR