電針對窒息腦癱幼鼠海馬、紋狀體和運動皮質GAP-43表達影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察電針對窒息性腦性癱瘓(Cerebral palsy,CP)新生大鼠海馬、紋狀體和運動皮質內神經生長相關蛋白(Growth associated protein,GAP-43)表達的影響,探討電針治療腦癱的意義及機制。 方法:1、7日齡新生Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,隨機分為假手術組、CP造模組、CP+電針組3組,每組24只。各組大鼠再隨機分為術后3、7、14、21d4個時間組,每組6只;2、3組大鼠

2、在吸入乙醚淺麻醉的狀態(tài)下,取頸前正中切口,電針組、造模組分離左側頸總動脈并結扎,置于氧氣濃度為8%、氮氣濃度為92%的密閉氮氧倉中缺氧2h,以Longa評分2~3分的實驗鼠視為成功模型,隨機納入電針組和造模組;假手術組僅分離左側頸總動脈即縫合切口,3組大鼠于術后返回母鼠籠中喂養(yǎng);3、電針組于造模后24h開始治療,選取百會、大椎、脊中、后會等穴位針刺,針接66805-Ⅱ電針儀,每日2次,各時間組在最后1日第2次治療后2h處死取材:4、取前

3、囟前1~3mm(觀察運動皮質區(qū)和紋狀體區(qū))、前囟后3~5mm(觀察海馬區(qū))各厚2mm的兩塊冠狀腦組織切片,片厚4μm。每塊大鼠腦組織各制作一張免疫組化染色(SABC法)及一張HE染色的切片:5、采用Leica IM50圖像采集系統對各組免疫組化切片進行圖像采集,在不同大鼠左側腦組織切片的海馬(CA1-3)區(qū)、紋狀體區(qū)和運動皮質區(qū)6個完整而不重疊的高倍鏡視野(×400)采圖,應用Image-Pro Plus圖像分析軟件對每個視野下陽性反應

4、物的平均光密度和陽性面積率進行測定,觀察GAP-43在大鼠腦組織切片的左側海馬(CA1-3)區(qū)、紋狀體區(qū)和運動皮質區(qū)表達的變化。 結果:1、光鏡下觀察HE染色切片可見,假手術組各時間點腦組織形態(tài)基本正常。造模組和電針組大鼠各時間點左側腦組織在不同區(qū)域出現典型的凋亡細胞形態(tài)變化,細胞染色質濃縮、聚集于核邊緣成塊狀、環(huán)狀或新月狀;細胞體積縮小、核固縮深染、細胞膜出泡、凋亡小體形成。未凋亡神經元細胞胞體腫脹,變大,胞漿染色變淺。7、1

5、4、21d大鼠腦組織凋亡細胞有減少的趨勢,神經元變性逐漸消失;2、各組GAP-43免疫組化染色陽性物質呈棕黃色顆粒,聚集于神經元胞體及軸突。假手術組免疫陽性顆粒染色淺,數量少;而造模組和電針組海馬、紋狀體及運動皮質神經細胞胞漿可見大量深棕色GAP-43免疫陽性顆粒,其中運動皮質各層神經細胞均有陽性反應;3、與假手術組比較,造模組和電針組在不同的腦區(qū)各時間點GAP-43表達的平均光密度與陽性面積率都顯著增高(P<0.01);電針組在大多數

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