1、感染是骨科臨床實(shí)踐中重點(diǎn)關(guān)注的問(wèn)題之一，無(wú)論是假體相關(guān)性感染還是諸如開(kāi)放性骨折、慢性骨髓炎等其它骨科感染，往往具有病原學(xué)復(fù)雜，抗生素耐藥等問(wèn)題，而對(duì)諸如“無(wú)菌性假體”松動(dòng)這樣的臨床診斷中到底有無(wú)細(xì)菌的存在更是莫衷一是，爭(zhēng)議頗多。臨床傳統(tǒng)應(yīng)用的微生物純培養(yǎng)方法對(duì)于這些問(wèn)題的回答力有未逮。脫胎于環(huán)境工程學(xué)科的分子生物學(xué)技術(shù)末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Terminal Restriction Fragment Length Polymorphi

2、sm，T-RFLP）通過(guò)對(duì)系統(tǒng)中微生物的標(biāo)記DNA-16S rDNA-的檢測(cè)，獲取許多長(zhǎng)度不同的末端限制性片段（Terminal Restriction Fragment，T-RF）或稱分類操作單元（Operational
　　 Taxonomic Unit，OTU），從而可以全景式的解析系統(tǒng)中所有細(xì)菌群落的結(jié)構(gòu)，這尤其對(duì)于檢測(cè)那些臨床傳統(tǒng)方法不能培養(yǎng)的細(xì)菌意義重大。近年來(lái)T-RFLP方法正被逐漸應(yīng)用于臨床病原菌的檢測(cè)，例如腸道

3、菌群、陰道菌群等，但應(yīng)用于骨科感染的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 研究目的：
　　 1.應(yīng)用 T-RFLP技術(shù)分析懷疑感染的骨科標(biāo)本中細(xì)菌群落分布情況；
　　 2.比較T-RFLP技術(shù)得到的結(jié)果與臨床傳統(tǒng)純培養(yǎng)結(jié)果的異同；
　　 3.初步評(píng)價(jià)該技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)及其應(yīng)用于臨床的前景。
　　 研究方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象：骨科感染標(biāo)本（包括假體相關(guān)性和非假體相關(guān)性），其它科感染標(biāo)本；
　　 2

4、.細(xì)菌檢測(cè)方法：T-RFLP，臨床純培養(yǎng)；
　　 3.分析方法：
　　 i.對(duì)T-RFLP自身結(jié)果進(jìn)行聚類分析；
　　 ii.對(duì)兩者的比較則應(yīng)用克隆文庫(kù)測(cè)序、TAP（T-RFLP AnalysisProgram）和臨床結(jié)果電子酶切的方法。
　　 研究結(jié)果：
　　 1.收集了59份臨床樣品，最終14份得到了T-RFLP譜圖；
　　 2.聚類分析顯示，樣品可按照解剖部位分類，每類中末端限制性片

5、段（T-RFs）的分布具有一般性規(guī)律：其中膝關(guān)節(jié)樣品6、11、12、17中豐度最高的片段都是80bp、82bp、85bp，其總豐度超過(guò)40％；脊椎樣品30、47中豐度最高的片段都是479bp，總豐度超過(guò)60％；
　　 3.對(duì)13號(hào)樣品構(gòu)建了克隆文庫(kù)并測(cè)序，Blast分析（Basic Local AlignmentSearch Tool），序列結(jié)果為停乳鏈球菌，與臨床培養(yǎng)結(jié)果一致；
　　 4.臨床已知培養(yǎng)結(jié)果者電子酶切分析

6、得到的 T-RFs大多與 T-RFLP實(shí)測(cè)情況相符（為豐度最多的片段，且兩者相差在1～3bp）。
　　 結(jié)論：
　　 本研究應(yīng)用末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)對(duì)骨科感染標(biāo)本中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的分布進(jìn)行了全景式的掃描分析，并同臨床傳統(tǒng)純培養(yǎng)方法進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)：
　　 1.無(wú)論有無(wú)假體的存在，相同解剖部位的感染中細(xì)菌群落的分布都具有很高的相似性；
　　 2.部分臨床診斷為“無(wú)菌性假體松動(dòng)”的病例中可能也是有細(xì)菌感