1、本研究首先建立AKI的急性缺血再灌注損傷小鼠模型，采用夾閉左側(cè)腎動(dòng)脈20分鐘的方法造成左腎缺血/再灌注損傷。在成功制造急性腎臟缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，收集小鼠術(shù)后0小時(shí)、4小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)的左側(cè)腎組織，利用HE、PAS染色和TUNEL染色評(píng)估不同時(shí)間點(diǎn)腎臟病理損傷程度和腎小管上皮細(xì)胞凋亡程度，用western-blot以及real-timePCR檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)動(dòng)物標(biāo)本中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78和凋亡蛋白CHO

2、P、Caspase12的表達(dá)量及其相應(yīng)的mRNA表達(dá)，從而得到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和腎臟急性缺血再灌注損傷之間的關(guān)系。結(jié)果顯示HE、PAS染色中24h手術(shù)組腎小管上皮細(xì)胞壞死明顯，病變最重。TUNEL染色中24h手術(shù)組腎小管上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)最高。Western-blot顯示GRP78、CHOP在小鼠腎臟缺血/再灌注損傷后12小時(shí)表達(dá)最多，24小時(shí)組開始降低，Caspase12在損傷后12小時(shí)剪切最多。realtime PCR結(jié)果顯示GRP78、C

3、HOP和Caspase12 mRNA水平在腎臟缺血/再灌注后4小時(shí)升至峰值，之后逐漸下降。 在此基礎(chǔ)上，我們用?；撬嵝苊撗跄懰?TUDCA)對(duì)急性缺血再灌注損傷進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示腎臟水腫淤血現(xiàn)象改善，HE、PAS染色顯示小管壞死評(píng)分顯著降低，TUNEL陽性染色細(xì)胞數(shù)目降低，凋亡指數(shù)明顯下降，與生理鹽水手術(shù)組比較有顯著差異。Western-blot結(jié)果顯示GRP78和CHOP在TUDCA干預(yù)的手術(shù)組中，表達(dá)明顯下調(diào)；Caspase

4、12在TUDCA手術(shù)組中的剪切活化明顯減少。Real-time PCR顯示給予TUDCA干預(yù)后，GRP78、CHOP和Caspase12的mRNA表達(dá)水平均下調(diào)，與生理鹽水手術(shù)組比較具有顯著差異。 綜上，本研究發(fā)現(xiàn)，在夾閉小鼠左側(cè)腎動(dòng)脈致急性腎臟缺血/再灌注損傷模型中，組織學(xué)損傷顯示再灌注后24小時(shí)最嚴(yán)重。GRP78、CHOP和Caspase12在再灌注后其mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高或激活，其變化早于組織學(xué)改變。提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)