1、目的:觀察姜黃素對大鼠腦缺血再灌注后海馬CA1區(qū)GRP78、GADD153和Caspase-12表達及神經(jīng)元凋亡的影響,闡明姜黃素對大鼠全腦缺血再灌注損傷誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響,進一步闡明姜黃素腦保護作用的分子機制,為該藥臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:雄性SD大鼠144只,隨機分成四組:假手術(shù)組(S組)、缺血再灌注組(IR組)、溶劑對照組(VC組)及姜黃素組(Cur組)。S組僅燒灼雙側(cè)椎動脈,游離雙側(cè)頸總動脈但不阻

2、斷；其余三組在燒灼雙側(cè)椎動脈、游離雙側(cè)頸總動脈24 h后,阻斷雙側(cè)頸總動脈15 min,建立四血管閉塞全腦缺血模型,VC組大鼠在缺血前1 h腹腔注射羧甲基纖維素鈉,Cur組大鼠在缺血前1 h腹腔注射姜黃素200 mg/kg;上述實驗組在再灌注12 h、1 d、3 d、7 d四個時間點處死,并且上述四組再分為兩個亞組:①各時間點多聚甲醛灌注固定大腦組織后,通過HE染色觀察各時間點海馬細胞形態(tài)改變、免疫組化觀察GRP78、GADD153和C

3、aspase-12的表達及DNA斷端末端標記(TUNEL)法標記凋亡陽性細胞(n=6)；②各時間點大鼠急性斷頭處死,迅速冰上取海馬組織液氮低溫冰凍保存,裂解組織,提取目的蛋白,用免疫蛋白印跡法對GRP78、GADD153和Caspase-12進行半定量分析(n=3)。
　　 結(jié)果:
　　 1、形態(tài)學變化:與S組海馬各區(qū)錐體細胞相比,VC組和IR組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞排列稀疏、胞漿濃縮、胞核固縮碎裂；Cur組在相應(yīng)時間

4、點與IR組病理變化規(guī)律基本一致,但損傷較輕。
　　 2、凋亡細胞計數(shù):各實驗組凋亡細胞主要集中在CA1區(qū),再灌注12h出現(xiàn)少量凋亡細胞后逐漸增加,3 d達到高峰后減少,至7 d仍有少量凋亡細胞存在,IR組各時間點凋亡細胞數(shù)明顯高于S組及Cur組(P<0.05)。
　　 3、GRP78、GADD153和Caspase-12表達的變化:
　　 A、免疫組化:GRP78在S組海馬CA1區(qū)有少量表達；IR組海馬CA1區(qū)G

5、RP78的表達在再灌注12 h開始升高,至1d達峰值后逐漸下降。VC組和IR組各時間點之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Cur組CA1區(qū)GRP78的表達情況和規(guī)律與IR組相似,但表達水平明顯高于IR組(P<0.05)。GADD153在S組海馬CA1區(qū)有少量表達；IR組海馬CA1區(qū)GADD153的表達在再灌注12h開始升高,至3d達峰值后逐漸下降。VC組、IR組和Cur組各時間點之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。Caspase-1

6、2在S組海馬CA1區(qū)有少量表達；IR組海馬CA1區(qū)Caspase-12的表達在再灌注12h開始升高,至3d達峰值后逐漸下降。VC組和IR組各時間點之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Cur組CA1區(qū)Caspase-12的表達情況和規(guī)律與IR組相似,但表達水平明顯低于IR組(P<0.05)。
　　 B、免疫蛋白印跡:GRP78在S組海馬有少量表達；IR組海馬GRP78的表達在再灌注12 h開始升高,至1d達峰值后逐漸下降。VC組

7、和IR組各時間點之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Cur組GRP78的表達情況和規(guī)律與IR組相似,但表達水平明顯高于IR組(P<0.05)。GADD153在8組海馬有少量表達；IR組海馬區(qū)GADD153的表達在再灌注12 h開始升高,至3d達峰值后漸下降。VC組、IR組和Cur組各時間點之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。Caspase-12在S組海馬有少量表達；VC組于再灌注后12h表達明顯升高,至再灌注3d達高峰后逐漸下降。C