1、胃癌在我國是最常見腫瘤之一。目前據(jù)Parkin最新報道其發(fā)生率位居第四位,死亡率僅次于肺癌占第二位。手術是主要的治療措施,但由于多數(shù)患者有不同程度微轉移的存在,術后復發(fā)轉移的晚期胃癌患者臨床上十分多見,因此化療在胃癌綜合治療中處于非常重要的地位。目前國內(nèi)外常用的化療方案有效率在50％~70％,但是仍有一部分胃癌患者治療失敗。近年來研究表明惡性腫瘤細胞對化療藥物的敏感性下降是影響治療效果的主要原因。替尼泊甙(VM-26)是拓撲異構酶Ⅱ抑制

2、劑,被美國FDA批準應用于多種腫瘤的治療。VM-26作用機制是通過抑制TopoⅡ,干擾DNA的雙鏈斷裂再連接作用,阻止細胞的復制轉錄功能,將細胞阻滯在G2/M期,誘導細胞的凋亡。該藥在臨床上的應用十分廣泛。該藥因良好的腦膜通透性,在小細胞肺癌,腦瘤,血液系統(tǒng)腫瘤和淋巴瘤等治療上占有重要的位置,但在胃癌方面報道較少。在胃癌的臨床治療中,省醫(yī)腫瘤科首次將VM-26,DDP,5-FU這三種有協(xié)同作用的藥物聯(lián)合組成了VDF方案治療中晚期胃癌,有

3、效率達71％,并與常用的EDF(VP-16+DDP+5-FU)方案(有效率48.8％)比較,差異有顯著意義。實驗室基礎研究結果也進一步說明了VDF方案設計的合理性和科學性。草酸鉑和順鉑均為胃癌化療的一線藥物,這兩種藥物雖然都是鉑類,作用位點都是細胞的DNA(草酸鉑對RNA亦有作用),但兩藥無交叉耐藥性,并且副作用不疊加,有報道提到兩藥有協(xié)同作用,但兩藥聯(lián)用國內(nèi)外報道較少,替尼泊甙(VM-26)與草酸鉑兩藥聯(lián)用及替尼泊甙(VM-26)、草

4、酸鉑與順鉑三藥聯(lián)用報道更少。
　　本實驗目的主要討論:
　　1.雙藥(替尼泊甙與+草酸鉑)聯(lián)合應用是否強于單藥(草酸鉑)對胃癌細胞的殺傷作用及增效機制;
　　2.在上述基礎上三藥(替尼泊甙+草酸鉑+順鉑)聯(lián)合應用能否強于雙藥(替尼泊甙+草酸鉑)聯(lián)用對胃癌細胞的殺傷作用增效機制。
　　3.在求證以上結果的試驗中,進一步明確三藥(替尼泊甙+草酸鉑+順鉑)聯(lián)用時可否減少藥物用量并取得增效結果,從而為以后的臨床工作提供理

5、論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　1.細胞選用人胃腺癌細胞株BGC-823;
　　2.實驗藥物選用VM-26(teniposide)以及常用的化療藥物順鉑(cisplatine,DDP),草酸鉑(oxaliplatine,OXA)
　　3.MTT比色法測定單藥及聯(lián)合用藥的不同濃度處理后細胞的生長抑制率,
　　4.并選用較小的濃度組用流式細胞儀檢測細胞的周期分布和凋亡率的變化
　　5.免疫組化測定凋亡相關

6、基因capase-9,livin的蛋白表達的影響。
　　6.實驗數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件處理,計量資料,采用正態(tài)性檢驗,方差齊性檢驗均數(shù)間的兩兩比較采用LSD方法;率的比較采用X2檢驗,單樣本t檢驗,以α=0.05為檢驗水準。
　　結果:1.MTT法結果顯示不同濃度的OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP處理細胞48h后,處理組與對照組以及各處理組之間OD值的差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),各組藥

7、物的IC50值分別為20.00μg/ml、3.38/1.51μg/ml、0.87/0.39/0.52μg/ml。結果表明,OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP等藥物可有效的抑制胃癌細胞BGC-823的生長,其抑制效應在一定的濃度范圍內(nèi)存在著劑量效應關系。雙藥抑制效應比單藥的抑制效應強,三藥抑制效應比雙藥的抑制效應強,個處理組之間有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。在相同摩爾濃度下,對胃癌細胞的抑制作用由強到弱為OXA/VM-

8、26/DDP>OXA/VM-26>OXA。
　　2.免疫組化結果顯示,2.5μg/ml的OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP處理胃癌細胞BGC-82348h后,凋亡相關基因caspase-9的蛋白表達陽性率明顯增加,livin蛋白的表達陽性率明顯減少。處理組與對照組及各處理組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.流式細胞儀結果顯示,三組藥物處理細胞后流式細胞圖上均出現(xiàn)典型的亞二倍體凋亡峰。單藥組(

9、OXA)在0、12、24、48h細胞的凋亡率為3.80％、5.89％、13.52％、31.68％;雙藥組(OXA/VM-26)在0、12、24、48h細胞的凋亡率為3.90％、11.99％、38.25％、69.11％;三藥組(OXA/VM-26/DDP)在0、12、24h,細胞的凋亡率為3.73％、42.79％、85.25％(本組細胞48h時大量凋亡,未做統(tǒng)計)。三組藥物處理細胞后,在0、12、24、48h,單藥組G2/M細胞為24.8

10、6％、17.89％、11.32％、3.76％;S期細胞為29.32％、33.57％、38.92％、43.27％;雙藥組為G2/M細胞為27.02％、21.53％、16.32％、2.06％;S期細胞為30.42％、34.67％、39.81％、46.72％;三藥組為G2/M細胞為29.02％、18.35％、7.15％、0.76％;S期細胞為28.32％、39.74％、52.63％、65.86％。各組與Oh相比,細胞凋亡和周期的變化均有統(tǒng)計學

11、意義(P<0.05)。
　　結論:1.OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP可抑制胃腺癌細胞BGC-823的生長,這種抑制作用在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。在相同摩爾濃度下,對胃癌細胞的抑制作用由強到弱為OXA/VM-26/DDP>OXA/VM-26>OXA。
　　2.OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP均可上調凋亡相關基因caspase-9的蛋白表達,可下調凋亡抑制基因livin蛋白的表達