1、第一部分、fenretinide特異性殺傷靜止期HL-60細胞及其機制研究
　　化療耐藥是急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia,AML）臨床治療工作中亟需解決的問題。目前臨床一線化療藥物都是細胞周期依賴性藥物，大部分只對增殖期AML細胞有效，而對處于相對靜止期的AML細胞效果很差，這是AML化療失敗的原因之一。因此，開發(fā)一種既是周期非依賴，又能通過其他途徑誘導細胞凋亡的新型化療藥物對于克服耐藥、改善AML治

2、療有著積極意義。Fenretinide（N-（4-hydroxyphenyl）retinamide,4-HPR）作為新型維甲酸衍生物，具有通過誘導活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）的產生殺傷腫瘤細胞的作用。除了對多種腫瘤細胞發(fā)揮誘導凋亡作用外，fenretinide還同時具有靶向白血病干細胞和預防腫瘤發(fā)生/復發(fā)的作用，從而顯示出其殺傷相對靜止的腫瘤細胞的潛力。時至目前，有關fenretinide對同一腫瘤

3、中不同周期狀態(tài)細胞的毒性差異及其差異機制仍不清楚。
　　為了在同一腫瘤特征的細胞平臺上探究fenretinide對增殖期和相對靜止期AML細胞的毒性差異及相關機制，本研究通過血清饑餓法誘導HL-60細胞周期同步化，建立了周期相對靜止的AML細胞模型。在此基礎上，我們借助流式細胞術、集落形成實驗檢測fenretinide對周期狀態(tài)不同的HL-60細胞活力、功能方面的影響并進行作用差異原因的探究，進而通過實時熒光定量PCR、蛋白印跡法

4、等探討其殺傷相關細胞群體的機制。
　　本研究的結果顯示：fenretinide對相對靜止的HL-60細胞具有更強的誘導凋亡和集落形成抑制作用，并且在該細胞群體中誘導出了更高的ROS增幅。Fenretinide誘導相對靜止HL-60細胞凋亡的過程伴隨著胞內ROS的快速積累和NF-κB亞基與靶基因表達的下調。據(jù)此我們主要得出以下結論：1、fenretinide對慢增殖HL-60細胞的殺傷作用強于快增殖細胞，這可能與前者在藥物作用下產生

5、更多ROS有關。2、fenretinide通過誘導ROS和抑制NF-κB信號通路殺傷慢增殖HL-60細胞。這些結論提示：fenretinide作為一種周期非依賴性新型化合物，能夠靶向相對靜止的AML細胞發(fā)揮作用，在克服化療耐藥和復發(fā)方面具有較高的臨床轉化潛質。
　　第二部分、急性髓系白血病細胞分子遺傳學特征與其對fenretinide反應性之間的關系研究
　　基于細胞形態(tài)學、免疫學、細胞遺傳學、分子遺傳學的急性髓系白血病（a

6、c ute myeloid leukemia,AML）精確分型是明確診斷、判斷危險度、制定化療方案的重要依據(jù)，同時也是以臨床AML樣本為對象的化療藥物研究的重要資料。傳統(tǒng)的依據(jù)患者細胞核型進行危險度分層的方法具有一定局限性，即核型正?；颊叩念A后也存在很大異質性。近年來，第二代DNA測序技術的發(fā)展使得FLT3、NPM1、CEBPA等眾多與AML發(fā)生發(fā)展相關的基因突變被發(fā)現(xiàn)，其中一些已經成為預后判斷的重要依據(jù)。各種基因突變的發(fā)生分別從不同角

7、度參與了對AML發(fā)生發(fā)展的影響，可能涉及到不同化療藥物發(fā)揮作用的信號通路。因此，細化AML樣本的分子遺傳學特征有助于加深對疾病發(fā)生機制和生物學特征的認識，對AML化療藥物相關研究大有裨益。但是，在fenretinide殺傷原代AML細胞過程中，其對攜帶不同基因突變的樣本是否具有作用效果的差異，現(xiàn)在仍不清楚。
　　為了明確攜帶不同基因突變的AML樣本對fenretinide處理是否具有敏感性差異，本研究收集了32例原代AML樣本，借

8、助流式細胞實驗檢測了其在fenretinide作用下活力變化情況，同時通過PCR實驗和測序、比對的方法對樣本的FLT3-ITD/TKD、NPM1、NRAS、IDH1、CEBPA等基因突變情況進行檢測，最后對兩部分信息進行匯總分析。
　　本研究的結果顯示：原代AML CD34+CD38-細胞在fenretinide處理下顯示出程度不一的活力下降現(xiàn)象。攜帶FLT3突變的樣本的活力下降幅度顯著大于FLT3野生型樣本，這種差異未在其他基因