1、前言:
　　 急性髓系白血病(AML)是造血干、祖細胞來源的惡性克隆性血液系統(tǒng)疾病,是成人急性白血病的主要類型,其發(fā)病機理尚不十分清楚,特別是復(fù)發(fā)難治的患者仍是臨床的主要問題,明確AML的發(fā)病機制有可能為AML的治療提供新的靶點。FA-BRCA通路為我們的研究提供了新的可能途徑。
　　 范可尼貧血(FA)是一種罕見的染色體隱性遺傳病,除FA-B為X-連鎖隱性遺傳外,其余均為常染色體隱性遺傳。其臨床特征主要表現(xiàn)為進行性的骨

2、髓造血功能衰竭,伴發(fā)多種先天畸形及明顯的腫瘤易感性,尤其是AML。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了15種FA亞型(A,B,C,D1,D2,E,F,G,I,J,L,M,N,O和P),其中八種蛋白(FANC-A,B,C,E,F,G,L,M)和FAAP24、FAAP100(FA相關(guān)蛋白24、100)形成FA核心復(fù)合物體(FAcorecomplex),啟動FANCD2及FANC1蛋白的單泛素化,單泛素化的FANCD2及FANC1蛋白與BRCA1、FANCD1、F

3、ANCN、FANCJ、FANCC、FANCE、FANCG、RAD51C、SLX4、RPA、ATR及NBS1等共同參與DNA損傷修復(fù)和對絲裂霉素C(MMC)、順鉑(CDDP)等的抵抗。其中FA核心復(fù)合體的形成是該過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié),并且此復(fù)合體的穩(wěn)定是決定下游一系列反應(yīng)正常進行的基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)FANCG可與FANCA發(fā)生相互作用,這種相互作用是維持組成FA核心復(fù)合體八種蛋白的穩(wěn)定和進入細胞核所必須的,也是FA核心復(fù)合體在核內(nèi)聚集的早期事件。在

4、眾多的FA患者中,FANCG蛋白缺失患者較其他亞型更易進展為AML/MDS(骨髓增生異常綜合征),進一步研究發(fā)現(xiàn)這些FA患者中存在FANCG基因突變。已有文獻報道FANcG蛋白表達缺失與散發(fā)性口腔癌和家族性胰腺癌的發(fā)生存在一定關(guān)聯(lián)。另有研究顯示FANCG蛋白在AML細胞株中存在表達缺失。文獻證明FANCG蛋白的調(diào)節(jié)和活化在FA-BRCA通路中起重要作用。
　　 AML是當今世界尚未攻克的醫(yī)學難題,對患者的生活質(zhì)量和生命健康都是嚴

5、重的威脅,而現(xiàn)有的治療手段均不能有效的保證治愈本病,同時在治療過程中會對患者造成一定的痛苦和損傷。本研究擬應(yīng)用SYBRGreenⅠ實時熒光定量PCR技術(shù)檢測AML患者與對照組中FANCGmRNA的表達狀態(tài),通過多樣本統(tǒng)計是否存在明顯差異,揭示FANCGmRNA表達狀態(tài)和AML發(fā)病及預(yù)后的關(guān)系,從而為研究AML的發(fā)病機制提供新的思路,為治療提供新的靶點。
　　 材料與方法:
　　 一、研究對象
　　 2011年1月

6、至2011年9月在中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科門診及病房就診的AML初診患者54例(男26例,女28例,中位年齡48歲)、完全緩解(CR)46例(男25例,女21例,中位年齡44歲)、對照組36例(骨髓細胞形態(tài)學檢查提示為:繼發(fā)性貧血、缺鐵性貧血及未見特征性血液病改變,男23例,女13例,中位年齡48.5歲)。病例診斷參照第三版《血液病診斷及療效標準》。
　　 二、主要試劑與器材
　　 淋巴細胞分離液(普利萊基因技術(shù)

7、有限公司)、Trizol(寶生物工程(大連)有限公司)、PCR引物合成(寶生物工程(大連)有限公司)、PrimeScript(R)RTreagentKitPerfectRealTime(寶生物工程(大連)有限公司)、SYBR(R)PremixExTaqTM(寶生物工程(大連)有限公司)、PCR儀(2720ThermalCycler,ABI)、Rotor-Gene6000熒光實時定量PCR儀(CorbettResearch公司)。

8、　　 三、實驗方法
　　 (一)密度梯度法提取骨髓液單個核細胞。
　　 (二)應(yīng)用Trizol按常規(guī)方法提取RNA。
　　 (三)cDNA合成,引物設(shè)計與合成。
　　 (四)SYBRGreenⅠ實時定量PCR及產(chǎn)物分析。
　　 (五)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析。
　　 利用相對定量公式2-△△Ct計算FANCG基因表達水平的差異。結(jié)果分析用SPSS17.0軟件進行,統(tǒng)計描述采用中位數(shù)及-X±S

9、D表示,組間差異若方差齊則采用獨立樣本t檢驗,同時對FANCG基因表達情況與年齡及原始細胞數(shù)進行相關(guān)性分析,采用Pearson相關(guān)檢驗。
　　 實驗結(jié)果:
　　 AML初診組FANCGmRNA的相對表達量為0.56±0.27,AMLCR組為0.75±0.54,對照組為0.85±0.45,AML初診組較對照組FANCGmRNA的表達量明顯降低(P＜0.05),AML初診組較AMLCR組的表達量亦明顯降低(P＜0.05),A

10、MLCR組與對照組比較表達量無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。AML初診組、AMLCR組及對照組FANCG基因表達與年齡均無直線相關(guān)關(guān)系(P=0.336、P=0.766、P=0.360),AML初診組與原始細胞數(shù)亦無直線相關(guān)關(guān)系(P=0.619)。
　　 結(jié)論:
　　 通過本實驗檢測到初診AML組FANCGmRNA的表達明顯減低,CRAML組的表達與對照組無明顯差別,推測部分AML患者中FANCGmRNA的表達減低使FANC