1、本文內(nèi)容主要分為四部分：
　　第一部分
　　急性髓系白血病 FLT3-ITD突變研究
　　目的:本研究在初發(fā)急性髓系白血病患者中篩查 FMS樣酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase3, FLT3)基因的內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)(internal tandem duplication, ITD)的發(fā)生率,探討 FLT3-ITD突變與各項(xiàng)臨床指標(biāo)之間的相互關(guān)系及其對(duì)預(yù)后的影響。
　　方法:從臨床收集284

2、例初診為急性髓系白血病的患者的骨髓液,分離其中的單個(gè)核細(xì)胞并提取基因組 DNA。使用PCR技術(shù)擴(kuò)增 FLT3基因的14至15號(hào)外顯子區(qū)域,對(duì) PCR產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像系統(tǒng)觀察是否有陽性產(chǎn)物條帶。比較FLT3-ITD突變陽性和FLT3-ITD突變陰性患者之間骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)及各項(xiàng)臨床資料的異同,分析 FLT3-ITD突變對(duì)急性髓系白血病患者預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:在284例急性髓系白血病患者中共檢出58例(

3、20.4％)患者攜帶有 FLT3-ITD突變,其中13例形態(tài)學(xué)診斷為 M1,10例為 M2,11例為 M3,24例為 M5,FLT3-ITD突變與 M1亞型的AML具有顯著的相關(guān)性(P<0.001)。98例正常核型的急性髓系白血病患者中檢出24例攜帶有 FLT3-ITD突變(24.5％)顯著高于其它核型中的檢出率(P<0.05)。與 FLT3-ITD突變陰性的患者相比,FLT3-ITD陽性的患者其初發(fā)時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)更高(P<0.05),但

4、其他指標(biāo)如年齡、性別、血紅蛋白、血小板和骨髓幼稚細(xì)胞比例等無明顯差異(P>0.05)。FLT3-ITD突變的患者 CR率僅有61％,低于無突變的患者(P<0.05);中位生存期為7個(gè)月,整體生存率明顯低于無突變的患者(P<0.05)。
　　結(jié)論:FLT3-ITD突變?cè)诩毙运柘蛋籽』颊咧谐Ｒ?尤見于正常核型患者。攜帶有FLT3-ITD突變的患者預(yù)后明顯較差,是較強(qiáng)的預(yù)后不良因素
　　第二部分
　　急性髓系白血病 NPM

5、1基因突變的研究
　　目的:本研究在初發(fā)急性髓系白血病患者中篩查核磷蛋白(Nucleoplasmin, NPM1)基因突變的發(fā)生率,探討 NPM1基因突變與各項(xiàng)臨床指標(biāo)之間的相互關(guān)系及其對(duì)預(yù)后的影響。
　　方法:從臨床收集284例初診急性髓系白血病的患者的骨髓液,分離其中的單個(gè)核細(xì)胞并提取基因組 DNA。使用PCR技術(shù)擴(kuò)增 NPM1基因的12號(hào)外顯子區(qū)域,并對(duì) PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。應(yīng)用突變陽性的產(chǎn)物制備標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒。同時(shí)制備內(nèi)

6、參照基因 ALB的標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR方法檢測(cè)不同濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品的PCR熒光強(qiáng)度,繪制NPM1基因與 ALB內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用相同的體系與條件應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR方法在患者中篩查 NPM1突變的情況。比較 NPM1突變陽性和NPM1突變陰性患者之間骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)及各項(xiàng)臨床資料的異同,分析 NPM1突變對(duì)急性髓系白血病患者預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:在284例急性髓系白血病患者中共檢出51例(18.

7、0％)患者攜帶有 NPM1突變,包括46例 A型突變,3例 B型突變和2例 D型突變。按形態(tài)學(xué)13例形態(tài)學(xué)診斷為M1,6例為 M2,3例為 M3,1例為 M4,28例為 M5,NPM1突變與 M1亞型的AML具有顯著的相關(guān)性(P<0.001)。98例正常核型的急性髓系白血病患者中檢出29例攜帶有 NPM1突變(29.6％)顯著高于其它核型中的檢出率(P<0.001)。與 NPM1突變陰性的患者相比,NPM1陽性的患者其初發(fā)時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)更

8、高,年齡較大,CD34的比例較低,且骨髓幼稚細(xì)胞比例較高(均 P<0.05)。其他指標(biāo)如性別、血紅蛋白、血小板等無明顯差異(P>0.05)。NPM1突變的患者 CR率僅有88.2％,中位生存期為13個(gè)月,與無突變的患者相比沒有明顯差異(P>0.05)。只有在正常核型患者中,按照 FLT3-ITD和NPM1突變情況分為 NPM1+/FLT3-ITD-、NPM1+/FLT3-ITD+、NPM1-/FLT3-ITD-和NPM1-/FLT3-I

9、TD+這四組進(jìn)行比較,CR率和生存期才有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:NPM1突變?cè)诩毙运柘蛋籽』颊咧休^常見,在正常核型患者中的比例更高。攜帶有 NPM1突變的患者預(yù)后較好。
　　第三部分
　　急性髓系白血病 CEBPα基因突變的研究
　　目的:本研究在初發(fā)急性髓系白血病患者中篩查 CAAT增強(qiáng)結(jié)合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα, CEBPα)基因突變的發(fā)生率,

10、探討 CEBPα基因突變與各項(xiàng)臨床指標(biāo)之間的相互關(guān)系及其對(duì)預(yù)后的影響。
　　方法:從臨床收集284例初診急性髓系白血病的患者的骨髓液,分離其中的單個(gè)核細(xì)胞并提取基因組 DNA。將 CEBPα基因分為兩個(gè)部分使用PCR技術(shù)分別擴(kuò)增,并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。對(duì)于測(cè)序結(jié)果難于判斷的病例重新進(jìn)行 PCR,產(chǎn)物純化后連接到質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌后挑陽性克隆進(jìn)行測(cè)序。比較 CEBPα突變陽性和CEBPα突變陰性患者之間骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)

11、及各項(xiàng)臨床資料的異同,分析 CEBPα突變對(duì)急性髓系白血病患者預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:在284例急性髓系白血病患者中共檢出40例(14.1％)患者攜帶有 CEBPα突變,其中檢出雙突變的有19例,檢出單突變有21例。按照形態(tài)學(xué)分類,有1例診斷為 M1,22例為 M2,1例為 M3,1例為 M4,9例為 M5,CEBPα突變與 M2亞型的AML具有顯著的相關(guān)性(P<0.001)。98例正常核型的急性髓系白血病患者中檢出30例攜帶有

12、CEBPα突變(30.6％)顯著高于其它核型中的檢出率(P<0.001)。與 CEBPα突變陰性的患者相比,CEBPα陽性的患者其初發(fā)時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)較低(P<0.05)。其它指標(biāo)如年齡、性別、血紅蛋白、血小板和骨髓幼稚細(xì)胞比例等無明顯差異(P>0.05)。CEBPα雙突變的患者 CR率達(dá)到91.7％, CEBPα單突變的患者 CR率達(dá)到85.7％,與無突變的患者相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。在正常核型患者中,CEBPα雙突變的患者中

13、位生存期為19個(gè)月,CEBPα單突變的患者中位生存期為15個(gè)月,整體生存率明顯高于無突變的患者(P<0.05)。
　　結(jié)論:CEBPα突變主要出現(xiàn)在正常核型的M2型急性髓系白血病患者中。攜帶有CEBPα雙突變的患者預(yù)后較好。
　　第四部分
　　急性髓系白血病 c-kit基因突變的研究
　　目的:本研究在核心結(jié)合因子(core binding factor, CBF)白血病患者中篩查 c-kit基因突變的發(fā)生率,探

14、討 c-kit基因突變與各項(xiàng)臨床指標(biāo)之間的相互關(guān)系及其對(duì)預(yù)后的影響。
　　方法:從臨床收集284例初診急性髓系白血病的患者的骨髓液,根據(jù)融合基因和染色體結(jié)果篩選出 CBF AML患者樣本,分離其中的單個(gè)核細(xì)胞并提取基因組 DNA。使用PCR技術(shù)分別擴(kuò)增 c-kit基因的8號(hào)外顯子和17號(hào)外顯子,并對(duì) PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。比較 c-kit突變陽性和c-kit突變陰性患者之間骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)及各項(xiàng)臨床資料的異同,分析 c-k

15、it突變對(duì) CBF AML患者預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:在284例急性髓系白血病患者中有57例患者為 CBF AML,其中17例(29.8％)患者攜帶有 c-kit突變。c-kit突變與 CBF AML具有顯著的相關(guān)性(P<0.001)。突變類型包括:8號(hào)外顯子突變的有6例,D816V突變有4例,D816Y突變有2例,D816H突變有2例,N822K突變有3例。按照形態(tài)學(xué)分類,有14例為 M2,1例為 M4,2例為 M5。與 c-k

16、it突變陰性的患者相比,c-kit陽性的患者其發(fā)病年齡較低(P<0.05)。其它指標(biāo)如性別、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血小板和骨髓幼稚細(xì)胞比例等無明顯差異(P>0.05)。c-kit突變的患者 CR率僅有58％,與 c-kit野生型的患者無明顯差異(P>0.05);c-kit突變的患者中位生存期為7個(gè)月,整體生存率明顯低于無突變的患者(P<0.05)。
　　結(jié)論:c-kit突變是 CBF AML患者特有的突變,攜帶有 c-kit突變的