1、目的：成年哺乳動物骨髓存在兩類干細胞：造血干細胞和間充質(zhì)干細胞（造血微環(huán)境的重要組分）。造血細胞的增殖和分化依賴于造血微環(huán)境，造血微環(huán)境中的造血細胞因子和細胞之間的相互作用，促進了造血細胞的增殖和分化。γ射線不僅可以導(dǎo)致急性骨髓抑制，而且還會引起長期的造血損傷后遺癥。長期造血損傷后遺癥的產(chǎn)生主要是因為γ射線損害了造血干細胞的自我更新。我們先前的研究已經(jīng)表明：重組人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）能修復(fù)γ射線引起的小鼠急性造血損傷，其作用

2、與其促進造血干細胞的增殖有關(guān)。為了進一步證實rhBMP-2修復(fù)γ射線引起的小鼠急性造血損傷的機制，我們設(shè)計本實驗以期證明rhBMP-2調(diào)控的間充質(zhì)干細胞增殖和分化在治療造血損傷時起重要的作用。
　　方法：（1）用XTT的方法檢測rhBMP-2對體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞的增殖作用。（2）用real-timePCR的方法檢測rhBMP-2對間充質(zhì)干細胞分泌的造血細胞因子mRNA表達的作用。（3）用ELISA試劑盒檢測rhBMP-2對間充

3、質(zhì)干細胞分泌造血細胞因子的蛋白含量的作用。（4）將綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓中分離純化的間充質(zhì)干細胞用Hoechst33342進行標(biāo)記，然后移植給BALB/c小鼠，移植后6周，分別用免疫熒光染色和流式細胞分析檢測間充質(zhì)干細胞在體內(nèi)的分化情況。
　　結(jié)果：（1）rhBMP-2在濃度為10ng/ml-1×105ng/ml之間能顯著促進MSCs的增殖，呈劑量依賴性。然而，這種增殖作用隨著rhBMP-2濃度進一步增加到1×106ng/ml

4、而開始減弱。（2）rhBMP-2能夠顯著地促進造血細胞因子IL-7、IL-11、G-CSF、M-CSF、SCF的mRNA表達。（3）用rhBMP-2處理體外培養(yǎng)的MSCs后，培養(yǎng)上清中造血細胞因子IL-6、IL-7、IL-11以及M-CSF的蛋白含量明顯高于對照組。（4）當(dāng)小鼠受到γ射線照射后，MSCs能夠歸巢到輻射損傷的造血組織并分化為造血細胞，rhBMP-2能顯著地增強MSCs的歸巢與分化，從而促進造血重建進程。
　　結(jié)論：正