1、油茶為山茶屬多年生常綠喬木，是我國獨有的食用木本油料樹種，廣泛分布于湖南、江西、廣西等17個省(市、自治區(qū))，1100多個縣(市)。 黃酮類化合物系色原烷或色原酮的衍生物，是一類在高等植物中大量存在的重要的次生代謝產(chǎn)物。它們有很多重要的功能，例如，參與花色的形成、UV防護、抵抗病原體等等。目前研究表明，它們還與人類的健康有著密切的關系，具有消除氧自由基、抗炎、抗癌、保護心腦血管系統(tǒng)等多種藥理作用。查爾酮合成酶是所有黃酮類化合物合

2、成的關鍵酶，它介導了黃酮類化合物合成的第一步，催化3個分子的丙二酞輔酶A與1個分子對羥基苯丙烯酞輔酶A縮合成袖皮素查爾酮，并以此為支架經(jīng)由查爾酮異構酶的異構作用使其他黃酮類化合物得以衍生出來。 本項研究以近成熟油茶種子構建的cDNA文庫為基礎，從中釣取經(jīng)EST數(shù)據(jù)初步分析并推斷可能是查爾酮合酶基因和查爾酮異構酶基因的5條cDNA序列進行研究，克隆號分別為1080、1279、4211、1216和1249。首先用微量堿裂解法提取5個

3、克隆的質粒DNA，然后進行PCR擴增和測序鑒定。5個克隆均擴增出特異譜帶，其中1216號克隆和1249號克隆的擴增片斷為1000bp左右，初步判斷為查爾酮異構酶基因序列；1080、1279和4211號克隆的推斷片斷大小依次為860bp、1030bp和1500bp左右，初步判斷為查爾酮合酶基因序列或片斷。 選擇4211號克隆和1216號克隆進行完整序列的測序，結果顯示，4211號克隆cDNA全長序列為1523bp，經(jīng)與核酸數(shù)據(jù)庫進

4、行比對分析，確定為查爾酮合酶基因；該基因編碼412個氨基酸，起始密碼子為GTG，終止密碼子為TAA，是個完整的CDS。經(jīng)網(wǎng)上比對，發(fā)現(xiàn)該cDNA序列比核酸數(shù)據(jù)庫中最長的查爾酮合酶基因cDNA序列還要多69個堿基，是目前世界上發(fā)現(xiàn)的最長的查爾酮合酶基因。1216克隆為查爾酮異構酶基因的cDNA，拼接校對后的長度為1002bp，編碼206個氨基酸，起始密碼子為GTG，終止密碼子為TAG，是查爾酮異構酶基因的完整CDS。兩個基因克隆現(xiàn)保存在中