1、脂肪酸水平升高在非酒精性脂肪肝的發(fā)病中具有重要作用。非脂肪組織中脂質(zhì)沉積導致細胞功能異常甚至細胞損傷稱為脂毒性。有研究顯示，不同性質(zhì)的脂肪酸其脂毒性是不同的。本研究分別用不同濃度的油酸(不飽和脂肪酸)、軟脂酸(飽和脂肪酸)作用于肝細胞株L02，建立脂肪變性的肝細胞模型；探討不同性質(zhì)脂肪酸對脂肪變性肝細胞凋亡、GRP78表達的影響。 方法： 1.采用不同濃度的油酸、軟脂酸誘導肝細胞株L02，建立肝細胞脂肪變性的模型。

2、 2.實驗分組：正常對照組、DMSO組、軟脂酸、油酸處理組。 3.MTI 法[1]篩選軟脂酸和油酸對L02 細胞的最佳作用濃度和作用時間。 4.油紅O染色光鏡下觀察細胞內(nèi)脂滴的變化；TG、MDA、AST、ALT試劑盒檢測細胞內(nèi)TG含量、膜脂質(zhì)過氧化及肝細胞的損傷情況。 5.流式細胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染檢測肝細胞株L02細胞凋亡率；AO/EB染色法觀察細胞凋亡形態(tài)；Western blot、R

3、T-PCR法檢測GRP78蛋白和mRNA的表達。 結(jié)果： 1.用油酸、軟脂酸分別成功誘導建立L02肝細胞株脂肪變性模型。油紅O染色光學顯微鏡下觀察：各時段對照組、DMSO組僅見少許橘紅色脂滴，軟脂酸各組的肝細胞均可見較多的橘紅色脂滴，油酸各組的肝細胞可見大量橘紅色脂滴，隨培養(yǎng)時間延長更為顯著，同時伴有脂滴融合現(xiàn)象。 2.與對照組和DMSO組比較，軟脂酸組、油酸組培養(yǎng)上清中的TG、MDA、AST、ALT逐漸升高(P

4、＜0.05)。 3.AO/EB染色、ANNEXIN V FITC/PI雙染檢測均顯示：油酸組和軟脂酸組的細胞凋亡率隨培養(yǎng)時間延長逐漸升高，在48、72h時，二者與對照組和DMSO組比較，差異具有顯著性；軟脂酸組凋亡率高于油酸組，差異也具有顯著性(P＜0.05)。 4.Western-blot、RT-PCR結(jié)果均顯示：各組GRP78蛋白和mRNA均有不同程度的表達，但是，在24、48、72h時，軟脂酸組的GRP78蛋白和m

5、RNA表達均比對照組、DMSO組和油酸組明顯增加(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.不同性質(zhì)的脂肪酸均可導致L02細胞發(fā)生以甘油三酯升高為特征的脂肪變性，軟脂酸比油酸更易引起脂變肝細胞的轉(zhuǎn)氨酶釋放、MDA產(chǎn)生增加以及細胞凋亡，提示飽和脂肪酸的脂毒性更強。 2.兩種類型的脂肪酸均可引起不同程度的肝細胞凋亡。飽和脂肪酸可能通過上調(diào)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78表達，啟動內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激從而誘導脂肪變性的肝細胞凋亡，而油酸不能影響GRP78