1、研究背景
　　淹溺是人類(lèi)意外死亡的重要原因，是全球性的公共衛(wèi)生課題之一。在海上工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、軍事行動(dòng)和日常生活中，海水淹溺事件時(shí)有發(fā)生。海水進(jìn)入呼吸道可直接導(dǎo)致溺水者窒息死亡，海水充塞肺泡后引起海水淹溺性肺水腫（pulmonaryedemaofseawaterdrowning，PE-SWD），導(dǎo)致海水淹溺型急性肺損傷（seawaterdrowning-inducedacutelunginjury，SW-ALI），繼而惡化為海水淹溺型

2、呼吸窘迫綜合征（seawaterdrowning-inducedrespiratorydistresssyndrome，SW-RDS）。
　　SW-ALI發(fā)生時(shí)，進(jìn)入肺內(nèi)的海水直接損傷肺泡上皮細(xì)胞（alveolarepithelialcell，AEC），并由此導(dǎo)致低氧血癥和酸中毒。因此，AEC對(duì)SW-ALI的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后至關(guān)重要。同時(shí)既往研究表明，F(xiàn)as/FasL途徑是急性肺損傷（acutelunginjury，ALI）時(shí)AE

3、C凋亡的重要機(jī)制之一。我們前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，SW-ALI存在肺組織細(xì)胞凋亡。但海水是否通過(guò)Fas/FasL途徑誘導(dǎo)AEC凋亡尚不清楚。
　　目的
　　通過(guò)建立SW-ALI動(dòng)物模型和使用海水干預(yù)人肺泡上皮A549細(xì)胞，觀察海水對(duì)AEC凋亡的影響，闡明Fas/FasL途徑在海水誘導(dǎo)AEC凋亡中的作用。
　　方法
　　1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：48只SD雄性大鼠隨機(jī)分為四組：（1）正常對(duì)照組；（2）1h海水組；（3）2h海水組；（4

4、）4h海水組。麻醉后，除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠通過(guò)氣管在4min內(nèi)勻速滴入4ml/kg海水。于各時(shí)間點(diǎn)將動(dòng)物處死后取肺組織，分別檢測(cè)肺濕/干比（W/D）、肺泡灌洗液（BALF）蛋白濃度、伊文斯藍(lán)漏出指數(shù)（ELI）；行肺組織病理染色（HE）和海水灌注4h后Fas和FasL蛋白免疫組化染色；Westernblotting檢測(cè)Fas、FasL、cleavedcaspase-8、cleavedcaspase-3蛋白。
　　2、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

5、：10％、20％、40％和60％海水（海水與培養(yǎng)基體積比分別為1:9、1:4、2:3和3:2）刺激人肺泡上皮A549細(xì)胞6h；40％海水刺激A549細(xì)胞1h、2h、4h和6h，觀察相同時(shí)間不同濃度海水和同一濃度海水不同時(shí)間對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。為明確FasL和caspase-8蛋白激活與海水誘導(dǎo)A549凋亡之間的關(guān)系，選擇40％海水干預(yù)6h作進(jìn)一步研究，在加入海水前60min，10μg/ml抗FasL中和性抗體NOK-2或20μΜcas

6、pase-8抑制劑Z-IETD-FMK預(yù)孵育細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡，Westernblotting檢測(cè)各組Fas、FasL、cleavedcaspase-8、cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：海水吸入后，大鼠肺W/D、BALF蛋白濃度及ELI明顯升高，結(jié)合HE結(jié)果表明海水導(dǎo)致了典型的ALI。免疫組化和Westernblotting檢測(cè)結(jié)果顯示，海水同時(shí)上調(diào)Fas、FasL蛋白的表達(dá)，c

7、leavedcaspase-8、cleavedcaspase-3蛋白也相應(yīng)增加。
　　2、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：海水呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡，同時(shí)Fas、FasL、cleavedcaspase-8和cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)相應(yīng)上調(diào)。加入NOK-2或Z-IETD-FMK可明顯減少細(xì)胞凋亡，而且NOK-2能夠降低FasL的表達(dá)和caspase-8、caspase-3蛋白活化，但對(duì)Fas沒(méi)有影響；Z-IETD-FMK不