1、目的：
　　評價重組人凋亡素2配體（rh-Apo2）在非小細胞肺癌（NSCLC）患者中的的免疫原性及其對療效的潛在影響。
　　方法：
　　1．將重組人凋亡素2配體(rh-Apo2L)用包被液稀釋成10μg/L，包被96孔板，向各孔加入50μl待檢血清樣品，同時設陽性和陰性對照孔，各孔加入相應的辣根過氧化物酶標記抗體。終止反應后，在酶標儀上讀取各孔450nm處的吸光度(OD)值。以同樣本血清用藥前OD值2.1倍作為產(chǎn)生抗

2、體的閾值，凡給藥后血清標本測得的OD值大于或等于閾值者，判定為陽性。
　　2.取對數(shù)生長期生長良好的肺癌細胞A549，以2.5×104個細胞/mL接種于96孔板，每孔200μL；以相應組別藥物分別干預細胞24h、48h后，采用MTT法檢測各組細胞生長情況，計算細胞生長抑制率。
　　3.取對數(shù)生長期生長良好的肺癌細胞A549，以7.5x104/mL接種于25mL培養(yǎng)瓶，加培養(yǎng)液至5mL，以相應組別藥物分別干預細胞48h后，采用

3、流式細胞儀技術檢測計算各組細胞凋亡率的變化。
　　4．統(tǒng)計學方法：計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，比較不同組別之間差異性用兩因素重復測量資料方差分析或者是單因素方差分析；使用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件對所獲數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，所有結果均以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1．ELISA檢測結果顯示：對照組患者在使用rh-Apo2L/安慰劑前后，均未發(fā)現(xiàn)有針對rh-Apo2L的抗體產(chǎn)生；實驗組患者在

4、使用rh-Apo2L/安慰劑前，亦均未發(fā)現(xiàn)有針對rh-Apo2L的抗體產(chǎn)生。而用藥后，2例患者血清中檢測到抗rh-Apo2L抗體IgM陽性，3例患者血清中檢測到抗rh-Apo2L抗體IgG陽性，1例患者血清中檢測到抗rh-Apo2L抗體IgE陽性。另有1例患者在進行藥物（rh-ApoL）皮膚過敏試驗中結果為陽性。
　　2．MTT法檢測結果顯示，TRAIL單藥組、TRAIL+陰性血清組、TRAIL+陽性血清（IgM）組、TRAIL+

5、陽性血清（IgG）組各組藥物干預24h、48h后，各組均呈現(xiàn)一定程度的細胞抑制與細胞凋亡。但是各組間肺癌細胞A549細胞抑制率與凋亡率相比較，差異均不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。表明各組的待檢血清中均未檢測到中和抗體的產(chǎn)生。
　　3．流式細胞儀檢測結果顯示：TRAIL單藥組、TRAIL+陰性血清組、TRAIL+陽性血清（IgM）組、TRAIL+陽性血清（IgG）組各組干預48h后，均呈現(xiàn)一定程度的細胞凋亡。與空白組組相比，采用

6、單因素方差分析，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。但是，TRAIL單藥組、TRAIL+陰性血清組、TRAIL+陽性血清（IgM）組、TRAIL+陽性血清（IgG）組各組間肺癌細胞A549凋亡率相比較，差異不具有統(tǒng)計學意義（P=0.564>0.05）。
　　結論：
　　1．rh-Apo2L對人可能具有一定的免疫原性，但是但所檢測到的結合抗體不具有中和活性，表明該免疫原性并不會減弱藥物的活性以及與活性相關的毒性。
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