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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探索溶血磷脂酰膽堿(Lysophosphatidylcholine，LPC)和質(zhì)子(H+)刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC）上細(xì)胞質(zhì)子感知受體G2A后對(duì)細(xì)胞間粘附因子1(Intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1)、血管細(xì)胞粘附因子1(Vascularcelladhesionmolecule-1，VCAM-1)表達(dá)量的影響，研究相
2、關(guān)受體介導(dǎo)信號(hào)通路，并探討動(dòng)脈硬化中的作用。
方法:培養(yǎng)HUVEC，短發(fā)夾RNA（shorthairpinRNA，shRNA）-G2A質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUVEC，并用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。PCR檢測(cè)G2A在HUVEC細(xì)胞及干擾G2A基因的HUVEC細(xì)胞中的表達(dá)。在LPC和質(zhì)子作用下檢測(cè)HUVEC細(xì)胞及G2A基因干擾的HUVEC細(xì)胞中鈣離子濃度、ICAM-1和VCAM-1表達(dá)量;檢測(cè)Gi蛋白抑制劑百日咳毒素(pertussisto
3、xin，PTX)在此過(guò)程中的作用。
結(jié)果:獲得了穩(wěn)定干擾的G2A基因的HUVEC細(xì)胞。質(zhì)子刺激HUVEC相比對(duì)照HUVECG2A表達(dá)量降低。LPC刺激升高HUVEC胞內(nèi)Ca2+濃度，質(zhì)子能降低由LPC動(dòng)員的Ca2+濃度。PTX能抑制由LPC引起的Ca2+濃度上升。LPC刺激G2A干擾細(xì)胞后ICAM-1，VCAM-1表達(dá)量比刺激未干擾細(xì)胞后ICAM-1，VCAM-1表達(dá)量降低。LPC單獨(dú)刺激G2A干擾細(xì)胞引起ICAM-1，VAC
4、M-1表達(dá)量下降;共同刺激G2A干擾細(xì)胞ICAM-1，VACM-1表達(dá)量無(wú)變化。
結(jié)論:質(zhì)子刺激能降低HUVEC中G2A表達(dá)。G2A是在HUVEC里中ICAM-1、VCAM-1表達(dá)主要相關(guān)受體。G2A干擾的HUVEC細(xì)胞中質(zhì)子拮抗LPC介導(dǎo)的ICAM-1、VCAM-1變化。LPC活化的G2A與Gi蛋白相偶聯(lián)，繼而升高胞內(nèi)Ca2+濃度;質(zhì)子拮抗LPC引起的Ca2+濃度上升。研究結(jié)果提示，雙配體受體對(duì)動(dòng)脈硬化發(fā)生中起重要的調(diào)控作用
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