1、目的：以不同濃度以及不同時程apelin干預體外培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞，觀察粘附分子ICAM-1(intercellular adhesion molecule1，細胞間粘附分子-1)和VCAM-1(Vascular cell adhesion molecule1，血管細胞粘附分子-1)以及趨化因子MCP-1(Monocyte chemotacticprotein1，單核細胞趨化因子-1)在apelin干預后的表達情況。
　　

2、方法：分離、培養(yǎng)和鑒定人臍靜脈內皮細胞，以0、10-10、10-9和10-8M apelin干預12小時后提取細胞總RNA檢測ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA表達差異。并以最佳干預濃度apelin干預細胞0h、2h、4h、8h、12h和24h，收集細胞及培養(yǎng)上清。以熒光定量PCR檢測不同時間點細胞ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA的表達差異，以蛋白免疫印跡實驗檢測蛋白表達差異，以及以ELISA方法檢測細胞培

3、養(yǎng)上清分泌蛋白水平差異。
　　 結果：Apelin干預人臍靜脈內皮細胞后ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA水平明顯增高，10-8M作用最強。ICAM-1表達在4h達最高，表達曲線呈鐘形，VCAM-1和MCP-1表達隨干預時間延長漸增強，分別于12h和24h達峰值。
　　 結論：Apelin呈濃度和時間依賴性刺激內皮細胞粘附分ICAM-1和VCAM-1以及趨化因子MCP-1的表達，apelin所引起的內皮細胞

4、炎癥反應提示其可能是一種促動脈粥樣硬化因子。
　　 目的：應用RNA干擾技術沉默人臍靜脈內皮細胞APJ基因的表達，研究APJ基因沉默后apelin調節(jié)人臍靜脈內皮細胞表達粘附分子和趨化因子的變化，初步闡明apelin-APJ系統(tǒng)在細胞學水平上對動脈粥樣硬化形成的可能調節(jié)機制。
　　 方法：針對人APJ cDNA編碼序列設計shRNA(small hairpinRNA，短發(fā)夾RNA)表達框，以pGenesil-1 vect

5、or為載體構建質粒，并設陰性對照質粒。以脂質體為介導對培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞進行穩(wěn)定轉染，檢測轉染細胞.APJ mRNA和蛋白表達鑒定基因沉默效率。以未轉染空白對照、轉染陰性siHK質粒和轉染siAPJ-2質粒的人臍靜脈內皮細胞為研究對象，apelin分別干預三組細胞后，應用熒光定量PCR檢測粘附分子ICAM-1和VCAM-1以及趨化因子MCP-1mRNA表達，蛋白免疫印跡實驗檢測蛋白表達。
　　 結果：APJ基因沉默后,與未轉

6、染空白對照、轉染陰性siHK質粒的人臍靜脈內皮細胞比較，apelin誘導的內皮細胞粘附分子ICAM-1和VCAM-1以及趨化因子MCP-1表達增高被顯著抑制(ICAM-1被抑制程度超過90％)。
　　 結論：APJ作為apelin受體在內皮細胞被誘導表達粘附分子和趨化因子增高這一反應過程中的地位是不可或缺的，apelin-APJ系統(tǒng)所引起的內皮細胞炎癥反應為其促動脈粥樣硬化機制提供了細胞學證據。
　　 目的：闡明JNK(

7、c-Jun N-terminal Kinase，c-Jun氨基末端激酶)和NF-κB(nuclear factor-kappa B，核因子κB)信號分子是否參與以及如何參與apelin-APJ所導致的內皮細胞炎癥的調節(jié)過程。
　　 方法：apelin分別干預人臍靜脈內皮細胞0、5、15、30、60和120 min。提取細胞磷酸化蛋白行蛋白免疫印跡實驗檢測p-JNK表達；提取細胞核蛋白和胞漿蛋白行蛋白免疫印跡實驗分別檢測NF-κB

8、-p65和IκBα表達。以JNK抑制劑SP600125和NF-κB抑制劑SN50分別預處理人臍靜脈內皮細胞后提取細胞總RNA行逆轉錄和熒光定量PCR檢測粘附分子ICAM-1和VCAM-1以及趨化因子MCP-1表達變化。
　　 結果：Apelin在60min激起p-JNK表達高峰，胞核NF-κB-p65蛋白在60min也出現最強信號，胞漿IκBα蛋白表達水平于30min出現谷底狀表達。JNK抑制劑和NF-κB抑制劑預處理細胞抑制a