1、目的：探討三七總皂甙(Panax notoginseng saponins，PNS)對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖、凋亡的影響及其可能的分子機(jī)制。 方法：1.采用四唑鹽(MTT)比色法觀察不同濃度PNS對SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響；2.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期時(shí)相分布及細(xì)胞凋亡率；3.流式細(xì)胞儀間接免疫熒光染色分析不同濃度PNS作用后細(xì)胞p-ERKl／2、Bcl-2蛋白表達(dá)水平；4.采用劃痕標(biāo)記／染料示蹤技術(shù)(scrap

2、e loading／dye transfer，SL／DT)觀察不同濃度PNS對SMMC-7721細(xì)胞GJIC功能的影響；5．采用RT-PCR方法分析不同濃度PNS對SMMC-7721細(xì)胞Cx32mRNA、hTERTmRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果：1.MTT結(jié)果顯示，不同濃度PNS對細(xì)胞生長均有一定抑制作用，且同一時(shí)間各組與對照組相比均有顯著性差異(P<0.05);100mg/L、200mg／L、400mg／L PNS處理細(xì)胞24～7

3、2h后，抑制率由17.86％～28.57增加至25.71％～45.71％，25mg／L、50mg／L PNS對細(xì)胞抑制作用較弱，800mg／L PNS則可導(dǎo)致細(xì)胞壞死。2.細(xì)胞周期分析顯示，不同濃度PNS處理細(xì)胞72h后，與對照組相比，G<,0>/G<,1>期細(xì)胞明顯增多，S期和G<,2>／M期細(xì)胞減少，且PNS濃度越高，該作用越強(qiáng)，其中400mg／L PNS處理細(xì)胞72h后G<,0>／G<,1>期細(xì)胞高達(dá)87.42％；同時(shí)PNS還能誘

4、導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡，并呈明顯的劑量效應(yīng)依賴關(guān)系。3.流式細(xì)胞儀間接免疫熒光染色分析結(jié)果顯示，不同濃度PNS處理細(xì)胞72h后，p-ERKl／2、Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率分別由16.89％、89.46％降至7.15％、58.62％。4.sL／DT檢測發(fā)現(xiàn)，常規(guī)培養(yǎng)的SMMC-7721細(xì)胞，其Lucifer Yellow(LY)染料局限于劃痕兩側(cè)細(xì)胞內(nèi)，無明顯的熒光染料傳輸現(xiàn)象，GJIC陰性；而經(jīng)lOOmg／L、200mg／L、40

5、0mg／L PNS處理細(xì)胞72h后，SMMC-7721細(xì)胞GJIc功能有不同程度的恢復(fù)或增強(qiáng)，且隨PNS濃度增高，LY染料傳輸范圍逐漸增大，最遠(yuǎn)可達(dá)3～4層細(xì)胞。5.RT-PCR結(jié)果顯示，不同濃度PNS處理細(xì)胞72h后，hTERTmRNA表達(dá)與對照組相比明顯降低(P<0.05)；而Cx32mRNA的表達(dá)在誘導(dǎo)前后則無明顯差別(P>0.05)。 結(jié)論：1．PNS可抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并能將細(xì)胞生長阻滯于G