增強型綠色熒光蛋白（EGFP）基因在日本血吸蟲體內(nèi)及原代培養(yǎng)細胞內(nèi)的異源表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討增強型綠色熒光蛋白(EGFP)基因在日本血吸蟲童蟲原代培養(yǎng)細胞、童蟲、成蟲體內(nèi)的異源表達，以及電穿法在血吸蟲基因轉(zhuǎn)化中的應用。為轉(zhuǎn)基因血吸蟲研究奠定基礎(chǔ)。 方法：制備血吸蟲童蟲原代培養(yǎng)細胞，用脂質(zhì)體將EGFP基因?qū)肱囵B(yǎng)細胞內(nèi)并觀察其表達；然后應用電穿孔技術(shù)將質(zhì)粒pEGFP-C1導入機械轉(zhuǎn)化的日本血吸蟲童蟲以及成蟲體內(nèi)，提取分離體外培養(yǎng)48h童蟲和成蟲的基因組DNA、總RNA和全蟲蛋白，分別用PCR、RT-PCR和We

2、sternblotting驗證異源基因在童蟲和成蟲體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄和翻譯，同時使用激光共聚焦掃描顯微鏡對EGFP在童蟲和成蟲體內(nèi)進行定位。最后，將電穿孔后的童蟲肌肉注射至小鼠體內(nèi)確定其感染力。 結(jié)果：成功的觀察到表達EGFP基因的血吸蟲童蟲培養(yǎng)細胞；PCR和RT-PCR分別成功擴增出760bp和276bp的預期大小的片斷；Westernblotting證實了EGFP基因在童蟲及成蟲體內(nèi)的表達；激光共聚焦掃描顯微鏡觀察顯示，EGFP主要

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