1、目的:多種腫瘤細(xì)胞中線粒體D-環(huán)已成為多態(tài)性研究熱點(diǎn)，但與惡性淋巴瘤的相關(guān)研究卻很少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究線粒體D-環(huán)（D-loop區(qū)）單核苷酸多態(tài)性(SNPs)，探究其與非霍奇金淋巴瘤的患病風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)后的相關(guān)性。
　　方法:
　　1收集2001年1月和2004年1月之間在河北醫(yī)科大學(xué)省四院血液內(nèi)科接受治療的河北省內(nèi)133名漢族NHL患者血液樣本，同時(shí)也收集了河北省內(nèi)159名漢族健康人的血液樣本作為對(duì)照。所有病人臨床資料相對(duì)完善。<

2、br>　　2應(yīng)用GENMED全血線粒體DNA萃取試劑盒提取非霍奇金淋巴瘤患者及健康人的線粒體DNA，提取后將其置于-80℃恒溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>　　3 PCR擴(kuò)增線粒體D-loop區(qū)目的基因，上游引物為5'-CCCCATGCTTACAAGCAAGT-3'（核苷酸16190-16209位點(diǎn)），下游引物為5'-GCTTTGAGGAGGTAAGCTAC-3'（核苷酸602-583位點(diǎn)），擴(kuò)增的目的片段長(zhǎng)度為982-bp，PCR的具體參數(shù)

3、參照PCR預(yù)混試劑盒說(shuō)明，將PCR產(chǎn)物純化測(cè)序，測(cè)序使用美國(guó)ABIPRISM Genetic Analyzer3100序列分析儀，同一標(biāo)本采用雙向重復(fù)測(cè)序，隨后檢測(cè)血標(biāo)本線粒體DNAD-loop區(qū)單核苷酸多態(tài)性。
　　4通過(guò)電話對(duì)患者進(jìn)行隨訪，計(jì)算其10年生存率，同時(shí)分析與患者臨床特征的關(guān)系。參照基因數(shù)據(jù)庫(kù)AC_000021號(hào)數(shù)據(jù)，從已經(jīng)完成的NHL患者線粒體D-Loop區(qū)的982bp序列中找出單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，對(duì)不同SNPs位

4、點(diǎn)與患者10年生存率的關(guān)系進(jìn)行分析。
　　5統(tǒng)計(jì)分析:應(yīng)用x2檢驗(yàn)對(duì)SNP位點(diǎn)顯示頻率進(jìn)行分析;采用KaPlan-Meier法繪制出生存曲線，應(yīng)用Log-Rank檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較;使用COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析進(jìn)行多因素生存分析，并以相對(duì)危險(xiǎn)度和95％可信區(qū)間(95％CI)來(lái)表示。所有數(shù)據(jù)結(jié)果應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P＜0.05，認(rèn)為差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1在隨訪的133例患者中（54例彌

5、漫型大B細(xì)胞淋巴瘤、41例T細(xì)胞淋巴瘤、38個(gè)其他類型的非霍奇金淋巴瘤），共計(jì)91位非霍奇金淋巴瘤患者具有10年隨訪數(shù)據(jù)，其中32個(gè)診斷為DLBCL，33個(gè)TCL和26個(gè)其他類型的非霍奇金淋巴瘤。
　　2在NHL組和對(duì)照組的長(zhǎng)為982bp線粒體D環(huán)區(qū)中共發(fā)現(xiàn)140個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，其中有26個(gè)SNPs，其等位基因頻率＞5％，可用來(lái)分析罹患腫瘤風(fēng)險(xiǎn)。
　　3應(yīng)用x2檢驗(yàn)在對(duì)單個(gè)SNPs進(jìn)行分析時(shí)，在NHL患者中發(fā)現(xiàn)73A/

6、G，263A/G和315C/Cinsert這三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)P值均＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。200A/G多態(tài)位點(diǎn)在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者中的P值＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。16362C/T和249Del/AP值均＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4對(duì)不同的性別及年齡（以60歲為界）NHL患者的10年生存率進(jìn)行比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);對(duì)不同的疾病分期及IPI評(píng)分NHL患者的10年生存率進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義（P＜0.05）。
　　5根據(jù)所找出的26個(gè)SNPs位點(diǎn)，繪制生存曲線，通過(guò)Log-Rank檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)146C/T、309Cinsert/C、315Cinsert/C、199C/T、16304C/T多肽位點(diǎn)與NHL的生存期有關(guān)。通過(guò)COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析這些核苷酸位點(diǎn)及臨床特征與NHL患者10年生存率的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)16304C/T位點(diǎn)是NHL患者的預(yù)后獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，基型為16304C的非霍奇金淋巴瘤患者的生存長(zhǎng)度明顯短于基

8、因型為16304T的患者(OR0.513;95％CI0.266-0.989; P=0.046)。
　　結(jié)論:
　　1線粒體DNAD-loop區(qū)是一個(gè)高度多態(tài)性區(qū)域。
　　273A/G、263A/G、315C/Cinsert多態(tài)位點(diǎn)與非霍奇金淋巴瘤的患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，攜帶73G、263G、315Cinsert等位基因可增加患非霍奇金淋巴瘤的風(fēng)險(xiǎn)。
　　3200A/G多肽位點(diǎn)特別與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，攜帶200G