1、MUC1基因位于人類1號染色體長臂2帶1區(qū)，其編碼產(chǎn)物MUC1粘蛋白是一種分布于人上皮細胞表面的高度糖化的糖蛋白，在部分血液系統(tǒng)腫瘤細胞表達水平上調(diào)，糖基化不全而致抗原表位暴露或形成新的抗原表位。MUC1基因在胃癌、卵巢癌等多種實體惡性腫瘤中異常表達。在血液腫瘤中異常表達，可望成為監(jiān)測血液腫瘤病情變化、判斷預后指導治療的分子生物學標志物以及血液腫瘤生物治療新的靶點。 目的: 用實時定量PCR方法測定MUC1基因在急性白血

2、病(AL)的表達量及觀察各病期MUC基因表達量與生存時間關(guān)系，同時觀察MUC1基因與急性白血病染色體核型異常關(guān)系，進一步為MUC1基因成為監(jiān)測微小殘留病灶、判斷病情變化和預后的分子生物學指標提供理論依據(jù)以及初步判斷MUC1基因?qū)毙园籽∈欠窬哂刑囟ǖ倪z傳學意義。 1. 病人資料：經(jīng)臨床、細胞形態(tài)學檢查、組織化學檢查以及流式細胞儀檢查細胞表面標志確診的非M3的初發(fā)或復發(fā)AL 93例，男58例，女35例。年齡4-85歲，平均年齡3

3、1.3歲。經(jīng)過常規(guī)細胞遺傳學檢查21例。其中急性髓細胞白血病(AML)56例，急性淋巴細胞白血病(ALL)33例，急性混合型白血病(AMLL)4例，同期取骨髓形態(tài)學檢查大致正常者骨髓15例作為正常對照。取MCG-803細胞株作為陽性對照，HL-60細胞株作為陰性對照。 2. 實驗方法：按常規(guī)方法分別采集AL患者和正常對照者的外周血或骨髓，分離單個核細胞，提取總RNA，根據(jù)文獻設(shè)計并合成引物，采用RT-PCR方法擴增MUC1基因并

4、電泳觀察，對MUC1定性檢查陽性組、陰性組和正常對照組運用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RQ-RT-PCR)方法檢測MUC1基因的表達量，觀察MUC1表達量與AL完全緩解率(CR)的關(guān)系，并進行追蹤研究，觀察白血病細胞MUC1基因表達量在不同病程中的變化規(guī)律以及MUC1基因表達陽性患者染色體核型變化。 3.統(tǒng)計方法：率的比較采用卡方檢驗，兩組均數(shù)比較采用t檢驗，三組均數(shù)比較采用方差檢驗。上述統(tǒng)計使用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0完成。

5、 結(jié)果: 1. AL患者MUC1基因表達的觀察93例AL中MUC1基因表達陽性49例，陽性率為52.7％。其中AML,56例中陽性31例，陽性率為55.4％，ALL33例中陽性15例，陽性率為45.5％；4例AMLL中陽性3例，陽性率為75％； ALL、AML及AMLL組MUC1基因表達陽性率無統(tǒng)計學差異(p=0.4379)。15例骨髓形態(tài)學檢查大致正常者骨髓MUC1基因表達全為陰性。AL組與正常對照組的MUC1表達率有

6、統(tǒng)計學差異(p<0.0001)。對MUC1基因表達陽性組、陰性組及正常對照組用RQ-RT-PCR方法進行MUC1基因的定量表達。結(jié)果顯示正常對照組中MUC1有表達，表達量為57.20±29.54拷貝/ABL，在AL組MUC1定性檢查陽性患者表達量為5494.49±7213.64拷貝/ABL，定性檢查陰性患者表達量為63.07±27.51拷貝/ABL。MUC1陽性表達組的表達量遠遠高于陰性表達組和正常對照組，陰性表達組和正常對照組比較無統(tǒng)

7、計學差異，MUC1定性檢查陽性患者在不同類型AL中的表達量和AML各亞型中的表達量無統(tǒng)計學差異。 2.MUC1陽性表達與AL染色體核型改變的關(guān)系10例MUC1表達陽性的患者中3例染色體核型正常，7例出現(xiàn)染色體畸變，其中1例染色體斷裂位點涉及到1q21，但未見重現(xiàn)性染色體lq21畸變。 3. MUC1基因表達與AL臨床關(guān)系觀察3.1MUC1基因表達與初治AL治療療效的觀察完成常規(guī)化療2療程或以上可供分析的初治病例49例，其

8、中ALL17例，獲得完全緩解14例，完全緩解率82.4％，AML31例，獲得完全緩解24例，完全緩解率77.4％，AMLL1例，未得到緩解。設(shè)>1000拷貝/ABL為高表達，<1000拷貝/ABL為低表達，MUC1高表達者完全緩解率高，p=0.0009。但ALL中高表達組和低表達組完全緩解率無統(tǒng)計學意義。MUC1基因表達與AL病程關(guān)系的觀察1例誘導后第3個月處于CR，但MUC1持續(xù)高表達，第4個月病情復發(fā)；第2例一直未獲得CR，MUC1

9、持續(xù)高水平表達；第3例經(jīng)多次強烈化療后獲得短暫CR，MUC1有過短暫下降；但很快升高；第4例完全緩解后第3個月MUC1表達量降低，14個月病情復發(fā)時MUC1升高；第5例為M2復發(fā)，多次化療未緩解，MUC1持續(xù)高表達；第6、7例獲得CR后MUC1低水平表達或陰性，患者無病生存至今；第8、10例未緩解，MUC1表達量一直較高；第9例為異基因骨髓移植后復發(fā)的M4病例未能獲得緩解，MUC1基因持續(xù)高水平，患者2月后死亡。 結(jié)論:

10、 1. MUC1在AL表達總的陽性率為52.7％，其中在AML表達陽性率為55.4％，在ALL表達陽性率為45.5％，在AMLL表達陽性率為75％，三者比較無統(tǒng)計學差異；在定性檢查陽性、陰性和正常對照中均有表達，陽性組高表達，陰性和正常對照組低表達，在ALL、AML和AMLL組中表達量無差異。 2. MUC1高表達患者治療完全緩解率為56.5％，低表達患者治療完全緩解率為96.2％，兩者比較有統(tǒng)計學差異，提示MUC1表達量高者化

11、療療效較差。 3. 治療前MUC1為陽性的AL患者誘導緩解后長期無病生存者，MUC1表達水平較低，未能獲得完全緩解者，MUC1可持續(xù)高水平表達，而在獲得完全緩解時MUC1仍為陽性者緩解期短，復發(fā)快，預后不良。因此認為檢測AL患者MUC1基因的表達，可以監(jiān)測AL化療后體內(nèi)微小殘留病狀況，并可提前發(fā)現(xiàn)白血病分子生物學復發(fā)，對監(jiān)測AL的預后、發(fā)現(xiàn)早期復發(fā)有一定意義。 4. 10例MUC1基因表達陽性的AL患者有7例出現(xiàn)染色體畸