人-鮭降鈣素嵌合基因在大腸桿菌中的串聯(lián)表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、降鈣素(Calcitonin,CT)是一種由32個(gè)氨基酸殘基組成的多肽類激素,它廣泛存在于哺乳動(dòng)物的甲狀腺和魚類的后腮體中,其主要生理功能是參與體內(nèi)的鈣磷代謝,通過抑制破骨細(xì)胞的活性,促進(jìn)鈣在骨中的沉淀,從而降低血鈣含量。天然降鈣素中鮭魚降鈣素(sCT)的活性最高,約為人降鈣素(hCT)的40倍。目前,鮭魚降鈣素已被廣泛應(yīng)用于臨床。 為保證降鈣素生物活性的同時(shí)盡量降低其在人體內(nèi)的抗原性,本實(shí)驗(yàn)室人工合成了新型人/鮭降鈣素嵌合基因

2、(己申請專利)。為提高表達(dá)量,我們采用串聯(lián)表達(dá)的方法。首先設(shè)計(jì)一小段柔性連接肽,經(jīng)過SWISS-MODEL與3D-PSSM蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測,通過此短肽首尾相接的串聯(lián)CT中降鈣素的活性位點(diǎn)和抗原位點(diǎn)均可以得到充分暴露。因此,我們用同尾酶法構(gòu)建了多拷貝串聯(lián)基因表達(dá)質(zhì)粒pLEX-nCT(n=1,2,3,4,5)(每段CT基因之間以編碼連接肽的DNA連接),并導(dǎo)入大腸桿菌GI724中表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE檢測,1-5拷貝串聯(lián)CT基因的表

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