1、生物體在新陳代謝中，細胞有氧呼吸所消耗的O2約10％被還原成H2O2。后者很容易被細胞中各種還原劑還原成·OH和OH-，而·OH是極毒的羥自由基，能氧化與它接觸的幾乎所有細胞組份，引起衰老、癌變及其它病癥。生物體內存在的過氧化氫酶（catalase，CAT）能有效地催化細胞中產生的高濃度H2O2（2H2O2→O2+2H2O），從而防止自由基對細胞的損傷。此外，CAT具有重要的工業(yè)應用價值。目前商品化的過氧化氫酶主要來源于牛肝、微球菌和黑

2、曲霉，主要用于工業(yè)生產。對于醫(yī)藥和保健來說，人源的CAT應用價值更高。本研究利用基因重組技術實現人CAT基因在大腸桿菌中實現了有生物活性的表達，為其開發(fā)利用奠定了基礎。
　　 本實驗使用人cDNA文庫，利用嵌套式PCR技術，獲得了編碼人CAT基因完整讀碼框的cDNA序列，選用pMAL-c2x、pBV221質粒作為載體，經過定向克隆將人CAT基因分別構建了融合pMAL-c2x-CAT和非融合表達載體pBV-CAT，并轉化到大腸桿菌

3、TB1和JM109中實現表達。
　　 在融合表達中，分別選擇了37℃、28℃、20℃作為不同誘導溫度對pMAL-c2x-CAT重組菌進行誘導表達。隨著溫度的降低，可溶性目的蛋白的表達量逐步增加，12h誘導后表達產物可占總菌蛋白的23％。該表達產物（MBP-CAT）經親和層析純化后并未表現出CAT活性。用Factor Xa將MBP蛋白切掉后，產物明顯具有CAT活性，說明MBP蛋白的存在可能影響了CAT蛋白的正確折疊，從而影響了它的

4、酶學活性。而在pBV221-CAT非融合表達體系中，經溫度誘導后，目的蛋白不僅呈可溶性，且具有CAT活性，但表達量較低。
　　 在目的蛋白的活性測定中，本文采用了KMnO4染色法和紫外分光光度法進行活性測定。KMnO4染色法方法簡便直觀，易操作，特異性好，但不適用于活性定量測定；而紫外分光光度法檢測速率快，靈敏度高，操作簡便，適于過氧化氫酶活性的快速定量測定。
　　 本研究還對重組酶的性質進行了研究（酶的熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)