1、目的:探討轉(zhuǎn)自殺基因的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)對(duì)供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的cGVHD效應(yīng)的影響，為臨床預(yù)防和治療cGVHD同時(shí)保留GVL效應(yīng)探索新的方法。將BALB/C小鼠為供鼠，將其脾淋巴細(xì)胞輸注入對(duì)受鼠CB6F1小鼠體內(nèi)，行半相合移植，建立慢性GVHD模型。體外鑒定轉(zhuǎn)自殺基因的樹(shù)突狀細(xì)胞(TK-DC)的免疫耐受作用，并檢測(cè)在小鼠體內(nèi)成功植活、能誘導(dǎo)其自殺后，把TK-DC作用于慢性GVHD模型，研究該細(xì)胞對(duì)小鼠慢性GVHD的治療作用，并根據(jù)TK

2、-DC對(duì)GVHD效應(yīng)的調(diào)控結(jié)果，啟動(dòng)自殺基因，誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，做到既能減輕慢性GVHD，又不削弱GVL效應(yīng)的目的。
　　 方法:
　　 1.體外鑒定DC細(xì)胞的免疫耐受作用:用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)鑒定DC細(xì)胞、轉(zhuǎn)自殺基因DC細(xì)胞(TK-DC)、TGF-β培養(yǎng)的DC細(xì)胞(TGFβ-DC)、TGF-β培養(yǎng)的轉(zhuǎn)自殺基因DC細(xì)胞(TGFβ-TK-DC)的誘導(dǎo)耐受功能，并用LPS刺激使各組DC成熟，觀察對(duì)T淋巴細(xì)胞的活化功能。
　　

3、 2.將TGFβ-TK-DC細(xì)胞經(jīng)尾靜脈輸注入小鼠體內(nèi)，于輸注后第1、15、30天應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GFP熒光量，鑒定該細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的植活。于輸注后第15天用更昔洛韋(GCV)腹腔注射，啟動(dòng)TK基因，體內(nèi)誘導(dǎo)細(xì)胞自殺，第30天再次用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GFP熒光量，觀察體內(nèi)TGFβ-TK-DC數(shù)量的變化。
　　 3.建立半相合供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的慢性GVHD模型:以親代BALB/C（H-2d，♂）為供鼠，以Balb/c×C57B

4、L/6 CB6F1（H-2d/b，♀）為受鼠行脾淋巴細(xì)胞半相合移植，建立慢性GVHD模型，通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的反應(yīng)性，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定T細(xì)胞中分泌IL-4、IFN-γ的CD8+T細(xì)胞量，觀察cGVHD效應(yīng)。
　　 4.建立TGFβ-TK-DC細(xì)胞治療慢性GVHD模型:移植后第25天應(yīng)用該樹(shù)突狀細(xì)胞尾靜脈注射模型小鼠，同時(shí)設(shè)置TGFβ-DC對(duì)照組、空白對(duì)照組和環(huán)孢素A治療對(duì)照組，于移植后第40天再次觀察cGVHD效應(yīng)

5、的改變。
　　 5.建立GCV治療慢性GVHD模型:于移植后第40天予各DC細(xì)胞治療組腹腔注射GCV（更昔洛韋）啟動(dòng)自殺基因，同時(shí)設(shè)置腹腔注射注射用水對(duì)照組、空白對(duì)照組、環(huán)孢素A藥物停藥對(duì)照組，于移植后第55天再次觀察各組cGVHD效應(yīng)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)TGF-β培養(yǎng)后，TK-DC表現(xiàn)出明顯的致耐受性，其刺激淋巴細(xì)胞活化增殖的效應(yīng)比普通TK-DC明顯減低。但TGF-β不能抵抗LPS對(duì)DC細(xì)胞刺激

6、成熟的作用。 TK-DC與DC的作用類似，證明轉(zhuǎn)入TK基因未對(duì)DC細(xì)胞的功能造成影響。
　　 2.在TK-DC細(xì)胞注入小鼠體內(nèi)后第30天，可以檢測(cè)到GFP熒光，表明TK-DC細(xì)胞成功植入。在更昔洛韋腹腔注射后小鼠體內(nèi)DC細(xì)胞較對(duì)照組明顯減少，說(shuō)明更昔洛韋在體內(nèi)成功誘導(dǎo)TK-DC凋亡。
　　 3.移植后小鼠出現(xiàn)嘴角脫毛等cGVHD臨床表現(xiàn)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)體內(nèi)分泌IL-4的CD8+T細(xì)胞數(shù)量較正常小鼠明顯增高，提示造模成功。