1、本文分析了白楊素對(duì)慢性支氣管哮喘模型氣道炎癥和氣道重塑的影響。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：白楊素對(duì)人氣道平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究。
　　目的：探索白楊素對(duì)人氣道平滑肌細(xì)胞(HASMCs)增殖、凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：采用cell counting kit-8（CCK-8）法測(cè)定白楊素對(duì)HASMCs以及血小板源性生長因子-BB(PDGF-BB)誘導(dǎo)的HASMCs增殖的影響;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

2、白楊素和PDGF-BB單獨(dú)或聯(lián)合作用對(duì)HASMCs的凋亡的影響;運(yùn)用WesternBlot方法評(píng)價(jià)白楊素對(duì)PDGF-BB刺激后的HASMCs中ERK1/2磷酸化水平的影響。
　　結(jié)果：白楊素(20μM，40μM)在24 h和48 h可以顯著抑制HASMCs的增殖(P＜0.05)，且呈劑量和時(shí)間依賴性。PDGF-BB(10 ng/mL)可顯著促進(jìn)HASMCs增殖(P＜0.05)，而白楊素(10μM，20μM，40μM)在24h和48

3、h均明顯抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的HASMCs增殖(P＜0.05)，也呈現(xiàn)一定的劑量和時(shí)間依賴關(guān)系。PDGF-BB(10 ng/ml)和白楊素(20μM)對(duì)HASMCs凋亡無明顯影響。白楊素(20μM)對(duì)HASMCs中ERK1/2基礎(chǔ)狀態(tài)的磷酸化水平?jīng)]有明顯影響，但是可以明顯抑制PDGF-BB(10 ng/ml)誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化水平上升（P＜0.05）。
　　結(jié)論：白楊素可以抑制基礎(chǔ)狀態(tài)以及PDGF-BB誘導(dǎo)下HASMCs的

4、增殖;白楊素抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖可能是通過降低細(xì)胞內(nèi)ERK1/2磷酸化水平發(fā)揮作用。
　　第二部分：白楊素對(duì)慢性支氣管哮喘模型小鼠氣道炎癥和道重塑的影響。
　　目的：探索白楊素對(duì)慢性支氣管哮喘模型小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：48只雌性BALB/c小鼠按照隨機(jī)原則分為對(duì)照組、哮喘組、地塞米松組和白楊素組，每組12只。第0、14天，腹腔注射卵清蛋白(ovalbumin，OVA)致敏;第2

5、1天開始，1％ OVA霧化30 min，每周3次，共8周。第21天開始，白楊素組小鼠給予白楊素（100 mg/kg）灌胃，每日一次，共8周;地塞米松組小鼠給予地塞米松(2 mg/kg)腹腔注射，每次霧化前30 min注射，每周三次，共8周。末次激發(fā)24 h后，使用小鼠肺功能儀進(jìn)行氣道反應(yīng)性測(cè)定。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-13及血清中總IgE水平。取肺組織病理石蠟切片

6、行蘇木精-伊紅(HE)染色，觀察肺組織炎癥浸潤情況，PAS染色觀察杯狀細(xì)胞增生程度，免疫組化半定量法檢測(cè)氣道α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha smooth muscle actin，α-SMA)的表達(dá)。運(yùn)用Western Blot方法檢測(cè)小鼠肺組織中Akt、p-Akt、ERK、p-ERK蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：肺功能檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各組小鼠的肺阻力(RL)基礎(chǔ)值無明顯差異;應(yīng)用氯化乙酰膽堿(Ach)進(jìn)行激發(fā)時(shí)，隨濃度增加，對(duì)照組RL輕度增

7、加，哮喘組RL顯著增加;當(dāng)氯化乙酰膽堿濃度在3.125 mg/mL及更高濃度時(shí)，哮喘組氣道阻力較對(duì)照組明顯增加(P＜0.05);當(dāng)氯化乙酰膽堿劑量在6.25 mg/mL及更高濃度時(shí)，地塞米松組和白楊素組氣道阻力較哮喘組顯著降低（P＜0.05）。哮喘組小鼠BALF中總炎癥細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞較對(duì)照組顯著增加（P＜0.05）;地塞米松組和白楊素組小鼠BALF中總炎癥細(xì)胞數(shù)和各類炎癥細(xì)胞數(shù)均較哮喘組明顯減少(P＜

8、0.05)。哮喘組小鼠BALF中IL-4和IL-13較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05);地塞米松組和白楊素組小鼠BALF中兩者水平均較哮喘組明顯降低(P＜0.05)。哮喘組總IgE在血清中的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)，地塞米松組和白楊素組小鼠血清中總IgE水平較哮喘組明顯下降(P＜0.05)。對(duì)照組小鼠氣道內(nèi)PAS陽性上皮細(xì)胞極少，哮喘組小鼠與對(duì)照組相比氣管壁PAS陽性上皮細(xì)胞明顯增加(P＜0.05);地塞米松組和白楊素組與哮喘

9、組相比杯狀細(xì)胞增生顯著減輕(P＜0.05)。對(duì)照組小鼠氣道周圍α-SMA染色陽性面積很小，哮喘組小鼠與對(duì)照組相比，哮喘組小鼠肺組織α-SMA染色陽性面積明顯增加（P＜0.05）;地塞米松組和白楊素組與哮喘組相比α-SMA染色陽性面積明顯減少(P＜0.05)。正常組小鼠肺組織中Akt、ERK1/2磷酸化水平較低，在OVA致敏和激發(fā)后，哮喘組Akt、ERK1/2磷酸化水平較正常組明顯增高(P＜0.05)，地塞米松和白楊素可以顯著抑制肺組織中