1、第一部分普羅布考對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠系統(tǒng)性炎癥及腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響
　　目的:觀察普羅布考對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠脂代謝、體內(nèi)氧化應(yīng)激、系統(tǒng)性炎癥及腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響，探討其對神經(jīng)保護(hù)的潛在價(jià)值。
　　方法:將40只SD大鼠隨機(jī)分為兩組:NG16只:給予普通飼料喂養(yǎng)，8周末隨機(jī)抽取8只大鼠(NG8W)處死進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，剩余8只(NG16W)繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)。高脂飲食組(HG)24只，高脂飼料喂養(yǎng)8周后隨機(jī)

2、抽取8只大鼠(HG8W)處死進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。第9周開始把高脂飲食組剩下的大鼠隨機(jī)分為兩亞組:高脂飲食組(HG16W)8只及普羅布考干預(yù)組(PB16W)8只，兩組均繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)，PB組每天6pm給予5％普羅布考混懸液100mg/d.kg灌胃1次共8周，NG16W及HG16W組均給予不含普羅布考的0.5％羧甲基纖維素鈉灌胃。各組大鼠處死前禁食12h并稱重和測量體長，麻醉處死后采集血漿、肝臟、脂肪、腦等組織標(biāo)本，計(jì)算大鼠Lee's指

3、數(shù)、體脂指數(shù)和肝指數(shù)，測定血漿TC,TG, LDL, ox-LDL, HDL, FBS, FINS, ALT, AST, hs-CRP, TNF-α, IL-1β, IL-6,SOD，MDA，T-AOC水平，計(jì)算HOMA-IR（FIRI）值，HE染色觀察腹部脂肪和肝臟組織病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)測定腦組織中Iba-1表達(dá)情況。
　　結(jié)果:各組大鼠體重均隨著周齡增大而逐漸增加，12周后HG組體重明顯高于NG組(p＜0.05)，在8、

4、16周末HG組lee's指數(shù)、肝指數(shù)、體脂指數(shù)明顯高于NG組(p＜0.05)，普羅布考干預(yù)后，PB16W組體重增長減緩，lee's指數(shù)、肝指數(shù)、體脂指數(shù)較HG16W組下降明顯(p＜0.05)。
　　在第8、16周末NG、HG兩組空腹血糖無顯著性差異，而HG組Fins及FIRI明顯高于NG組(p＜0.05)。普羅布考干預(yù)后，PB16W組FIns及FIRI較HG16W組明顯改善(p＜0.05)，但略高于NG16W組(p＞0.05)。<

5、br>　　在16周末HG16W組大鼠肝臟ALT、AST水平明顯高于NG16W組(p＜0.05)，出現(xiàn)重度肝脂肪變性，脂肪細(xì)胞直徑也明顯增大，存在炎性細(xì)胞浸潤，普羅布考干預(yù)后，PB16W組與HG18W比較ALT、AST及肝脂肪變性程度明顯下降(p＜0.05)，脂肪細(xì)胞直徑減小，炎性細(xì)胞浸潤減輕。NG16W組ALT、AST正常，無肝脂肪變性。
　　在第8、16周末HG組TG、TC、LDL-C、Ox-LDL明顯高于同期NG組(p＜0.0

6、5)，HDL-C水平無明顯差異(p＞0.05)。普羅布考干預(yù)后，PB16W組TG、TC、LDL-C、Ox-LDL較HG16W組明顯下降(p＜0.05)，但仍明顯高于NG16W組(p＜0.05)，HDL-C水平也明顯降低(p＜0.05)。
　　在16周末HG16W組hs-CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA水平明顯高于NG16W組(p＜0.05)，SOD活力及T-AOC水平明顯低于NG16W組(p

7、＜0.05);普羅布考干預(yù)后，PB16W組血漿hs-CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6較HG16W組明顯降低(p＜0.05)，血漿MDA顯著減少(p＜0.05)，SOD、T-AOC較HG16W組明顯恢復(fù)(p＜0.05)，
　　在16周末HG16W組大鼠腦內(nèi)Iba-1表達(dá)（OD值）明顯增加，普羅布考干預(yù)后PB16W組Iba-1表達(dá)與HG16W組比較明顯減輕。
　　結(jié)論:高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠模型表現(xiàn)出血脂異常、胰島素抵抗、

8、非酒精性脂肪肝等代謝綜合征表現(xiàn)，還存在全身抗氧化能力下降、慢性低度系統(tǒng)性炎癥狀態(tài)和腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活。普羅布考干預(yù)可改善高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠全身胰島素抵抗，抗氧化儲(chǔ)備，減輕系統(tǒng)性炎癥狀態(tài)和腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活。
　　第二部分普羅布考預(yù)處理對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用
　　目的:觀察普羅布考對缺血再灌注損傷腦組織抗氧化能力、炎癥及小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響，探討普羅布考預(yù)處理對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷的

9、保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法:將160只大鼠隨機(jī)分為五組，每組32只:假手術(shù)組（Sham）、正常對照組(NG)、正常干預(yù)組(NG+PB)、高脂對照組(HG)、高脂干預(yù)組(HG+PB)。NG+PB組:普通飼料喂養(yǎng)8周后，每天給予5％普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周;Sham及NG組:給予普通飼料喂養(yǎng)8周后，每天給予等容積不含普羅布考的0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC)灌胃1次共8周;HG+PB組:高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天加予

10、5％普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周;HG組:高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天給等量不含普羅布考的0.5％CMC灌胃共8周。Sham組行假手術(shù)，其余四組于實(shí)驗(yàn)第16周末線栓法制作左側(cè)大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注損傷模型，缺血2小時(shí)再灌注24小時(shí)后進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分，處死動(dòng)物采集腦標(biāo)本，TTC染色測定腦梗死體積(n=8)，干濕重法測定腦組織含水量(n=8)，免疫組化法測定腦組織中IL-1β、TNF-α、Iba-1蛋白水平(n=8)，缺血皮

11、質(zhì)腦組織勻漿后測定IL-1β、TNF-α、SOD、MDA、NO、NOS、iNOS含量(n=8)。
　　結(jié)果: Sham組無神經(jīng)功能缺損，HG組大鼠神經(jīng)功能評分明顯高于NG組(P＜0.05); NG+PB組評分略低于NG組(P＞0.05); HG+PB組大鼠組評分明顯低于HG組(P＜0.05)。
　　NG+PB組腦含水量稍高于Sham組(P＞0.05)，其余各組腦含水量明顯高于Sham組(P＜0.05); NG組大鼠腦含水量明

12、顯高于NG組(P＜0.05); NG+PB、HG+PB兩組腦含水量明顯低于對應(yīng)的NG、NG組（均P＜0.05）;HG+PB組腦含水量高于NG+PB組(P＜0.05)。
　　Sham組未見腦梗死灶;HG組大鼠腦梗死體積比明顯高于NG組(P＜0.05);NG+PB、HG+PB兩組大鼠腦梗死體積比明顯低于對應(yīng)的NG、NG組（均P＜0.05）;HG+PB組腦梗死體積比仍高于NG+PB組(P＜0.05)。
　　免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明

13、，各組缺血側(cè)腦組織中Iba-1、IL-1β、TNF-α的表達(dá)（OD值）均高于Sham組（均P＜0.05），HG組表達(dá)均高于NG組（均P＜0.05）;NG+PB、HG+PB兩組表達(dá)均較對應(yīng)的NG、NG組減少（均P＜0.05）;但HG+PB組仍高于NG+PB組(P＜0.05)。
　　各組缺血再灌注各組腦組織SOD活力均較Sham組明顯下降，而MDA含量增高(P＜0.05); HG組大鼠腦組織SOD活力較NG組下降明顯，而MDA、IL-

14、1β、TNF-α含量明顯增高(P＜0.05);兩干預(yù)組腦組織SOD活力均較相應(yīng)對照組明顯升高，而MDA、IL-1β、TNF-α含量較相應(yīng)對照組明顯下降(P＜0.05)。各組腦組織中NO、NOS、iNOS水平均較Sham組明顯升高(P＜0.05)，HG組較NG組更加明顯(P＜0.05)，兩干預(yù)組腦組織NO及其合成酶NOS、iNOS活力均較相應(yīng)模型組下降(P＜0.05)，NG+PB組和HG+PB組差異不明顯(P＞0.05)。
　　結(jié)論

15、:高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠缺血再灌注后腦組織氧化應(yīng)激和炎癥因子表達(dá)水平較普通大鼠明顯升高，小膠質(zhì)細(xì)胞激活及腦水腫更明顯，梗死體積更大，神經(jīng)功能評分更高，腦損害更嚴(yán)重。普羅布考預(yù)處理可顯著增高高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注后腦組織抗氧化能力，降低含氮自由基及炎癥因子的表達(dá)，減少腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。普羅布考預(yù)處理可改善高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損，減輕腦水腫和腦梗死體積，保護(hù)腦缺血再灌注損傷。
　　第三部分普羅布考預(yù)

16、處理對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷大腦皮層細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
　　目的:觀察普羅布考預(yù)處理對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡和腦組織中相關(guān)凋亡因子及通路的影響，進(jìn)一步探討普羅布考對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制。
　　方法:將80只大鼠隨機(jī)分為五組，每組16只:假手術(shù)組（sham）、正常對照組(NG)、正常干預(yù)組(NG+PB)、高脂對照組(HG)、高脂干預(yù)組(HG+PB)。NG+PB組:普通飼

17、料喂養(yǎng)8周后，每天給予5％普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周;sham及NG組:給予普通飼料喂養(yǎng)8周后，每天給予等容積不含普羅布考的0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC)灌胃1次共8周;HG+PB組:高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天加予5％普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周;HG組:高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天給予給予等量不含普羅布考的0.5％CMC灌胃共8周。Sham組行假手術(shù)，其余四組于實(shí)驗(yàn)第16周末制作大鼠大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注

18、損傷模型，缺血2小時(shí)再灌注24小時(shí)后TUNEL法檢測缺血大腦皮層凋亡細(xì)胞數(shù)，Western Blot法測定Bcl-2、caspase-3、Akt、p-Akt蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1) Sham組大腦皮層偶見凋亡細(xì)胞，HG組大鼠缺血大腦皮層凋亡細(xì)胞數(shù)較NG組明顯增多(P＜0.05)，NG+PB組及HG+PB組經(jīng)普羅布考預(yù)處理凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少（均P＜0.05），HG+PB組凋亡細(xì)胞數(shù)仍高于NG+PB組(P＜0.05)。

19、　　(2) NG組大鼠大腦皮層中Bcl-2表達(dá)水平較假手術(shù)組無明顯變化(P＞0.05)，HG組Bcl-2表達(dá)水平較NG組升高(P＜0.05);與NG、HG組比較，普羅布考預(yù)處理能夠顯著上調(diào)NG+PB組及HG+PB組Bcl-2表達(dá)水平（均P＜0.05）。腦缺血再灌注各組大腦皮層caspase-3蛋白表達(dá)均較假手術(shù)組增加(P＜0.05)，NG+PB組及HG+PB組經(jīng)普羅布考預(yù)處理caspase-3表達(dá)水平顯著下調(diào)(P＜0.05)，HG+PB

20、組caspase-3表達(dá)仍高于NG+PB組(P＜0.05)。
　　(3)各組大腦皮質(zhì)Akt總蛋白表達(dá)水平各組間無明顯變化(P＞0.05)。NG組Ser473 p-Akt蛋白水平均較假手術(shù)組略升高(P＞0.05)，余各組Ser473 p-Akt蛋白水平均較假手術(shù)升高(P＜0.05)，普羅布考預(yù)處理能夠顯著增加NG+PB組及HG+PB組Ser473 p-Akt蛋白水平(P＜0.05)。
　　結(jié)論:高脂飲食誘導(dǎo)肥胖促進(jìn)腦缺血再灌注