1、重瓣性狀是觀賞植物最重要的觀賞性狀之一，對(duì)此分子機(jī)理的研究可很大程度上改善植物的花型，使其更具有觀賞性?，F(xiàn)階段的研究集中于花特征基因如何決定花器官形成，也可從分子標(biāo)記方面著手定位相關(guān)基因。矮牽牛作為模式植物，研究其重瓣性狀則具有更大的意義。
　　結(jié)合前人對(duì)矮牽?；òl(fā)育過(guò)程的分析，可以推測(cè)重瓣形成發(fā)生在花發(fā)育早期階段，新的重瓣基因在花芽分化時(shí)期起作用，從而調(diào)控花原基數(shù)量，本研究以此為切入點(diǎn)，以期發(fā)掘與重瓣性狀相關(guān)的基因。以遺傳背景相

2、近的單重瓣矮牽牛為材料，采用圖位克隆的方法克隆矮牽牛重瓣相關(guān)基因。前期已用SRAP的分子標(biāo)記、ISSR標(biāo)記篩選后已在其附近找到了一個(gè)與重瓣性狀緊密連鎖的標(biāo)記，比對(duì)持續(xù)更新的矮牽?；蚪M測(cè)序文庫(kù)后，獲得其側(cè)翼延長(zhǎng)序列共2184468bp，現(xiàn)獲得結(jié)果如下：
　　1、本研究主要是在在此序列兩端設(shè)計(jì)特異引物，利用特異序列標(biāo)記引物進(jìn)行多態(tài)性分析，結(jié)合BSA標(biāo)記在1150株單重瓣分離群體中篩選驗(yàn)證與重瓣性狀緊密連鎖的標(biāo)記。通過(guò)初篩和后期結(jié)合B

3、SA方法篩選，現(xiàn)已找到8個(gè)與重瓣緊密連鎖的標(biāo)記，結(jié)合前期得到的9個(gè)，均只在重瓣中擴(kuò)增出條帶。用1150株群體對(duì)其中部分做重組率分析，均無(wú)交換單株，與重瓣性狀共分離。
　　2、結(jié)合上述先后得到的17個(gè)標(biāo)記可將與重瓣相關(guān)基因定位至1400kb-2100kb之間，對(duì)此區(qū)段的轉(zhuǎn)錄組結(jié)果進(jìn)行分析，獲得在單重瓣內(nèi)表達(dá)發(fā)生差異的區(qū)段，從此區(qū)段的序列特征分析：擴(kuò)增此片段，比對(duì)單瓣和重瓣矮牽牛中片段的差異，發(fā)現(xiàn)在單瓣中單個(gè)堿基發(fā)生了部分突變，其余未

4、有太大差異；而重瓣序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中的原始序列完全一致。
　　3、由于在單瓣和重瓣中，片段產(chǎn)生了單堿基突變，故對(duì)此片段的功能進(jìn)行分析：針對(duì)單瓣中堿基發(fā)生突變的片段用Gateway技術(shù)構(gòu)建RNAi干涉載體，轉(zhuǎn)化單瓣矮牽牛W115和野生煙草，分別獲得四棵轉(zhuǎn)基因矮牽牛和二十一棵煙草，其中煙草還未開(kāi)花無(wú)法觀測(cè)表型。矮牽牛未發(fā)現(xiàn)與花發(fā)育相關(guān)的性狀產(chǎn)生。
　　根據(jù)上述結(jié)果得出通過(guò)分子標(biāo)記技術(shù)結(jié)合轉(zhuǎn)錄組初步分析獲得的片段對(duì)單瓣矮牽牛在花器官表