1、瓜類細菌性果斑病菌（Acidovorax avenae subsp.citrulli，Aac）引起的瓜類細菌性果斑?。╞acterial fruit blotch，BFB）是葫蘆科植物上的一種毀滅性的細菌病害，嚴重影響果品和產量。近年來在我國許多地區(qū)均有報道，尤其作為哈密瓜主要產區(qū)的新疆等地，該病的發(fā)生對于哈密瓜產業(yè)具有極大的威脅。盡管BFB對經濟有重要作用，但是目前關于它的病原物的生物學以及與寄主植物互作的分子方面仍知之甚少，因此研究

2、瓜類細菌性果斑病菌的致病相關基因及其機理對于病害防治致關重要。
　　 鑒于此，我們幾經嘗試試圖通過構建Aac轉座子隨機插入突變體文庫，來尋找Aac中與致病相關的基因，然而由于Aac菌體本身一些特性使得對Aac進行遺傳操作十分困難。經過不斷改進實驗方案，我們終于通過三親交配原理成功建立了Aac xjL12菌株的轉座子（Mini-Tn5）隨機插入突變體文庫。通過接種哈密瓜幼苗來篩選致病性發(fā)生變化的突變體，成功的得到了三株致病性喪失和

3、一株致病性明顯減弱的突變體，利用亞克隆技術鑒定了轉座子插入位點，得到致病相關基因。同時我們也通過構建其中一個基因的插入失活突變體△araC，接種哈密瓜幼苗后發(fā)現(xiàn)△araC致病性完全喪失，這與轉座子插入得到突變體結果是完全一致的。
　　 此外，本研究還對Aac中群體感應系統(tǒng)（Quorum Sensing，QS）luxR同源基因進行功能研究。目前已知群體感應系統(tǒng)能夠調控著對動植物的毒性因子，而毒性因子的產生與細菌的致病性密切相關。本

4、課題組已報道Aac能夠產生群體感應信號分子，為了進一步研究Aac的群體感應信號分子的相關基因以及與致病性的相關性，本研究從群體感應信號分子的合成底物和信號分子的靶細胞為出發(fā)點，從Aac全基因組中找到了三個可能與信號分子相關的基因：luxR（LuxR family transcriptional regulator），acP（3-oxoacyl-（ACP）synthaseⅢ），acD（acyl-CoA dehydrogenase doma

5、in-containingprotein），通過同源重組的方法分別構建了突變株。通過致病性實驗和AHL檢測分析發(fā)現(xiàn)，與野生型相比，△luxR致病性有所下降，產生信號分子的能力減弱，而△acP和△acD沒有明顯變化。因此，我們對△luxR進行了進一步的驗證，結果發(fā)現(xiàn)△luxR能夠產生液滴坍塌現(xiàn)象，對抗生素耐受水平有所提高，并且對哈密瓜幼苗的致病能力下降，RT-PCR實驗結果表明，luxR基因的缺失對luxI基因的表達有抑制作用，從而證明了