1、水稻細(xì)菌性條斑病菌(Xanthomonasoryzaepathovaroryzicola，簡(jiǎn)稱Xoc)是水稻的主要病原菌之一，其引發(fā)的水稻細(xì)菌性條斑病可造成水稻嚴(yán)重減產(chǎn)。但目前還沒(méi)有有效的方法控制該病的發(fā)生，國(guó)內(nèi)外對(duì)Xoc的分子致病機(jī)理的研究還處于初步階段，因此系統(tǒng)地研究該菌致病相關(guān)基因的功能是非常有必要的。本研究從廣西分離株LT4分離到具有利福平抗性的野生型菌株XocGX01作為建庫(kù)出發(fā)菌株。首先對(duì)其進(jìn)行了分子鑒定，致病力檢測(cè)和表型分

2、析，證明其確實(shí)為水稻細(xì)條病菌。采用EZ:TN轉(zhuǎn)座子簽法構(gòu)建了XocGX01菌株的Tn5隨機(jī)插入突變體庫(kù)，共獲得52，392個(gè)突變體，轉(zhuǎn)化效率較高。利用改良后的針刺接種法在水稻日本晴品種上進(jìn)行致病性試驗(yàn)，從572個(gè)Tn5轉(zhuǎn)座子插入突變體中篩選到致病性明顯下降或完全喪失的突變體48株，并對(duì)它們進(jìn)行致病力評(píng)價(jià)分析，發(fā)現(xiàn)它們的致病力的降低程度不同，其中下降大于70％的有7株。為了了解這48個(gè)致病力下降突變體其表型的變化，對(duì)它們進(jìn)行了表型分析。結(jié)

3、果顯示，其中大部分致病缺陷的突變體其表型都有不同的變化。利用TAIL-PCR(ThermalasymmetricinterlacedPCR)的方法分離出突變體基因組中的Tn5轉(zhuǎn)座子側(cè)翼片段，經(jīng)測(cè)序分析和序列比對(duì)，將這48個(gè)突變體的Tn5轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)進(jìn)行了定位，定位到39個(gè)基因。結(jié)果表明，這些突變體的表型和致病力與定位出來(lái)的基因的功能對(duì)應(yīng)程度較高。這48個(gè)突變體涉及到39個(gè)不同的基因，包括：已知的致病相關(guān)基因，分別是與分泌系統(tǒng)、胞外多糖

4、和脂多糖合成有關(guān)的基因；一部分與細(xì)菌基礎(chǔ)代謝、基因調(diào)節(jié)相關(guān)的基因；6個(gè)編碼產(chǎn)物都注釋為假設(shè)蛋白的基因，未見(jiàn)與致病性相關(guān)的報(bào)道，可能參與DNA甲基化、RNA結(jié)構(gòu)形成以及其它未知生物學(xué)功能。為了確定這6個(gè)基因是致病相關(guān)基因從而證明該突變體庫(kù)的正確性，對(duì)其中一個(gè)基因的突變體進(jìn)行功能互補(bǔ)，結(jié)果表明其互補(bǔ)菌株的表型及致病力都能恢復(fù)到野生型的水平，說(shuō)明該突變體是正確可信的。進(jìn)而說(shuō)明采用EZ:TN轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法構(gòu)建的Tn5突變體庫(kù)作為篩選以及研究致病相