1、支原體屬于柔膜體綱支原體屬，個體微小且基因組也相對小。支原體無細胞壁，但它有結構復雜的細胞膜。為獲得其生存必的營養(yǎng)物質，支原體與宿主細胞的形成了緊密的聯(lián)系。另外，支原體的宿主廣泛包括哺乳動物、鳥類、魚類、節(jié)肢動物和植物。在哺乳動物中，它們通常定植呼吸道、胃腸道、泌尿生殖道、乳腺和眼睛的粘膜表面。牛支原體是已知的對牛最重要的病原之一，它是導致奶牛乳房炎和育肥牛肺炎和關節(jié)炎的重要病原，也是導致犢牛肺炎和關節(jié)炎的重要的原因。盡管DNA重組技術

2、能使支原體 DNA在大腸桿菌中克隆和表達，但很難將整個蛋白在其中一起表達。事實上，大部分的支原體用大腸桿菌的終止子 UGA編碼色氨酸，在實驗過程中，由于已知菌株 HB0801的全基因組序列，我們通過定點突變的方法將每個基因中的UGA都變?yōu)閁GG，使牛支原體基因能在大腸桿菌中完整表達。通過本實驗室的蛋白質組學操作工具（2-DE.MS），我們在毒力株 HB0801中鑒定出了16個抗原蛋白。
　　本研究的目的是克隆、表達和純化已經鑒定的

3、重要的免疫原性蛋白。本實驗選取了5個抗原蛋白在大腸桿菌中進行克隆表達。為了使色氨酸能成功在大腸桿菌中翻譯，先通過重疊延伸 PCR的方法定點將UGA突變?yōu)閁GG。在這5個基因中，編碼假想蛋白的Mbov_0739含有6個UGA位點，編碼轉酮酶基因（Mbov_0212）二氫硫辛酰、胺脫氫酶（Mbov_0106）和脂蛋白（Mbov_0579）都含有4個 UGA位點，編碼二氫硫辛酰胺脫氫酶 Mbov_0312含有3個UGA位點，通過定點突變，使它