1、背景：
　　胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,病理分期較早的患者可通過手術(shù)聯(lián)合化療取得較好的療效,病理分期晚的患者預(yù)后差,五年生存率低于10％,復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致胃癌患者死亡的主要原因。因此,尋找胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)分子和預(yù)測預(yù)后有效的生物學(xué)標(biāo)志分子一直是胃癌基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)。近年的研究發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白家族參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,與多藥耐藥、異常增殖、侵襲轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)表型相關(guān)。HSP27作為HSPs亞家族小分子熱休克蛋白的成員之一,也

2、參與了多種惡性疾病的發(fā)生發(fā)展,它可以通過不同信號通路調(diào)控多種腫瘤的增殖、耐藥、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)表型。有文獻(xiàn)報(bào)道,HSP27在胃癌組織中表達(dá)水平升高,與患者預(yù)后情況呈負(fù)相關(guān),但其具體機(jī)制尚不清楚,關(guān)于其與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系至今還鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究將以此為切入點(diǎn)展開研究,通過分析HSP27表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力之間的關(guān)系,探討以HSP27作為胃癌患者預(yù)后判斷標(biāo)志分子和治療靶點(diǎn)的應(yīng)用前景。
　　目的：
　　1.檢測 HS

3、P27在胃癌組織和細(xì)胞中的表達(dá),分析其表達(dá)水平與臨床特征之間的關(guān)系。
　　2.研究HSP27對胃癌細(xì)胞體內(nèi)體外侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　3.初步探討HSP27影響胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的機(jī)制。
　　方法：
　　1.檢測HSP27蛋白在胃癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)
　　1)免疫組織化學(xué)染色檢測HSP27在胃癌組織中的表達(dá)和分布,分析HSP27在胃癌中的表達(dá)強(qiáng)度與臨床病例特征及預(yù)后的相關(guān)性。
　　2) Weste

4、rn blot檢測不同轉(zhuǎn)移潛能胃癌細(xì)胞系中HSP27蛋白的表達(dá)水平。
　　2.HSP27對胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響
　　1)利用Transwell實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),檢測下調(diào)HSP27表達(dá)后胃癌細(xì)胞體外侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。
　　2)利用裸鼠體內(nèi)尾靜脈注射轉(zhuǎn)移試驗(yàn),觀察不同HSP27表達(dá)水平的胃癌細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的差異。
　　3.Western blot方法檢測下調(diào)HSP27表達(dá)的胃癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的蛋白表達(dá)

5、改變。
　　結(jié)果：
　　1.在118例胃癌組織中,HSP27的陽性表達(dá)率為69%(71/118)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析患者臨床病理結(jié)果顯示,HSP27蛋白的表達(dá)水平與淋巴結(jié)受累和高級別病理學(xué)分期呈顯著正相關(guān)性,而與年齡、性別、分化程度(p>0.05)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;并且HSP27表達(dá)越強(qiáng),在隨訪的4年中胃癌患者生存率越低。
　　2.Western blot和qRT-PCR方法對不同轉(zhuǎn)移潛能胃癌細(xì)胞系的HSP27蛋白水平和mRNA水

6、平進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示:在轉(zhuǎn)移潛能較高的MKN28-M、9811-P、SGC7901-M細(xì)胞系中 HSP27表達(dá)水平高,而轉(zhuǎn)移潛能較低的胃癌細(xì)胞系MKN28-NM、9811、SGC7901-NM中HSP27表達(dá)則較低。
　　3.胃癌細(xì)胞系MKN28、BGC823細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒siRNA下調(diào)HSP27的表達(dá),western blot和qRT-PCR結(jié)果證實(shí),HSP27的表達(dá)水平明顯降低。
　　4.Transwell及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

7、檢測發(fā)現(xiàn),與對照組細(xì)胞相比,HSP27表達(dá)下調(diào)的細(xì)胞MKN28-si、BGC823-si的體外侵襲轉(zhuǎn)移能力明顯減弱。
　　5.裸鼠尾靜脈注射轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與 NC對照組相比,HSP27表達(dá)下調(diào)的MKN28-si、BGC823-si細(xì)胞在祼鼠肺臟的轉(zhuǎn)移瘤發(fā)生率明顯降低。
　　6.Western blot結(jié)果顯示,HSP27表達(dá)下調(diào)的胃癌細(xì)胞MKN28-si、BGC823-si中,基質(zhì)金屬蛋白酶分子MMP-9水平明顯降低,而

8、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)水平無明顯改變。
　　結(jié)論:
　　1.HSP27表達(dá)水平與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力正相關(guān),胃癌中HSP27蛋白表達(dá)水平越高,其出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移受累和較高病理學(xué)分期的概率越大。HSP27表達(dá)水平與胃癌患者的生存率呈負(fù)相關(guān),HSP27有望成為胃癌患者臨床預(yù)后判斷新的生物分子標(biāo)志物。
　　2.降低胃癌 HSP27的表達(dá)水平,能夠抑制其體外、體內(nèi)的侵襲轉(zhuǎn)移能力。HSP27有可能成為抗胃癌轉(zhuǎn)移