1、背景和目的:
　　第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因(PTEN)是人體新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，它與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、凋亡、信號(hào)傳遞等密切相關(guān)。以往對(duì)PTEN的研究大多側(cè)重于腫瘤方面，近些年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)PTEN/Akt信號(hào)通路在心肌重構(gòu)、心肌肥厚、心肌缺血再灌注損傷等方面亦發(fā)揮著重要的作用，有研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用特異性藥物抑制PTEN的活性可以縮小心肌梗死后的梗死面積，改善心功能。心肌缺血預(yù)適應(yīng)和缺血后適應(yīng)可以降低心肌缺血再灌注損

2、傷，縮小心肌梗死面積，但其機(jī)制尚未完全闡明。心肌缺血預(yù)適應(yīng)和后適應(yīng)對(duì)心臟的保護(hù)作用是否與PTEN/Akt信號(hào)通路的調(diào)控有關(guān)，目前尚缺乏研究。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建心肌缺血再灌注、缺血預(yù)適應(yīng)及缺血后適應(yīng)動(dòng)物模型，觀察PTEN及其下游信號(hào)分子的改變，研究PTEN/Akt信號(hào)通路在心肌缺血再灌注損傷中的作用，探索PTEN/Akt信號(hào)通路在缺血預(yù)適應(yīng)和后適應(yīng)中的心臟保護(hù)機(jī)制。
　　方法:
　　選取體重在280～320g的雄性SD

3、大鼠60只隨機(jī)分成4組，每組15只:①假手術(shù)組（Sham組）:左冠狀動(dòng)脈前降支只穿線不結(jié)扎;②缺血再灌注組（IR組）:結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支30min，再灌注180min;③缺血預(yù)適應(yīng)組（IPre組）:結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支5 min、灌注5 min，反復(fù)3次后，結(jié)扎30min再灌注180min;④缺血后適應(yīng)組（IPost組）:結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支30min后，灌注30s、結(jié)扎30s，反復(fù)3次，再灌注180min。全程記錄心電圖的變化。每組

4、隨機(jī)選取6只，在造模結(jié)束時(shí)做Evans Blue、TTC染色，用于測(cè)量心肌缺血及梗死面積。其余9只于造模前后抽取靜脈血并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后留取缺血心肌組織，用酶標(biāo)法檢測(cè)血清肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)的活性，用HE染色法觀察心肌形態(tài)學(xué)變化，用Western blot法及免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)缺血心肌組織PTEN、p-Akt的蛋白表達(dá)水平，用實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)PTEN mRNA的表達(dá)水平。最后利用SPSS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

5、
　　結(jié)果:
　　1.心電圖變化:結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支血管后，心電圖可見(jiàn)ST段向上抬高，再灌注后ST段逐漸回落。
　　2.心肌缺血及梗死面積測(cè)定:Sham組無(wú)明顯心肌缺血及梗死，其余三組心肌缺血面積相似(P＞0.05);IR組梗死面積最大，IPre組和IPost組的梗死面積較IR組明顯縮小(P＜0.05)，但I(xiàn)Pre組和IPost組無(wú)明顯差異。
　　3.血清CK、LDH活性:缺血前四組水平相似，心肌缺血再灌注后I

6、R組、IPre組及IPost組CK、LDH含量明顯較Sham組升高;但與IR組比較，IPre組及IPost組的升高量較少(P＜0.05)，且IPre組及IPost組無(wú)差異。
　　4.缺血心肌PTEN、p-Akt蛋白表達(dá)水平:Western blot法及免疫組化法檢測(cè)結(jié)果相似。與IR組比較，IPre組及IPost組的PTEN表達(dá)量降低，p-Akt的表達(dá)水平升高(P＜0.05)。免疫組化法發(fā)現(xiàn)PTEN、p-Akt主要定位在胞漿，部分胞