1、氧化應(yīng)激能夠?qū)е麦w內(nèi)多種細(xì)胞及蛋白質(zhì)過氧化，并對(duì)帕金森病、阿爾茨海默病以及缺血性腦病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展有著重要作用。Sulfiredoxin-1(Srxn1)為一種內(nèi)源性抗氧化蛋白，具有神經(jīng)保護(hù)作用。然而，Srxn1在氧化應(yīng)激中的作用機(jī)制還未被深入研究。
　　 目的:探討Srxn1對(duì)雙氧水誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的抗氧化保護(hù)作用及其潛在機(jī)制。
　　 方法:(1)用不同濃度(60uM，100uM，140uM，1

2、80uM，200uM，240uM)的H2O2作用于PC12細(xì)胞24h，通過MTT和LDH測(cè)定從中篩選出最適H2O2濃度。再用該濃度作用于PC12細(xì)胞不同時(shí)間(3h，6h，12h，24h，48h)，通過MTT和LDH測(cè)定從中篩選出最適H2O2時(shí)間。(2)構(gòu)建三條Srxn1干擾質(zhì)粒載體(PLVT574，PLVT575，PLVT576)及一條陰性載體(PLVT4)，通過脂質(zhì)體(Lipofectamine2000)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染給PC12細(xì)胞，在倒置

3、顯微鏡和熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及轉(zhuǎn)染效率，用RT-PCR和Western Blot測(cè)定干擾效率。(3)用MTT及LDH試劑盒測(cè)定細(xì)胞活性及細(xì)胞損傷程度，用超氧化物歧化酶(SOD)、微量還原型谷胱甘肽測(cè)定試劑盒分析細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)。RT-PCR和Western國家自然科學(xué)基金資助(No.81070917和81271460) Blot進(jìn)一步測(cè)定Srxn1的表達(dá)與2-Cys Prdxs活性之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:(1) MTT和

4、LDH測(cè)定顯示，180uM H2O2作用于PC12細(xì)胞24h為最適氧化應(yīng)激模型。(2) RT-PCR和Western Blot分析顯示，與對(duì)照組相比，PLVT574、PLVT576和PLVT4的干擾效率不明顯，PLVT575的干擾效率顯著(P＜0.01)。(3) MTT和LDH結(jié)果顯示，干擾Srxn1能夠?qū)е录?xì)胞活性的降低及細(xì)胞損傷程度的增加。超氧化物歧化酶(SOD)和微量還原型谷胱甘肽測(cè)定試劑盒分析顯示，SOD和GSH在干擾Srxn1