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文檔簡介
1、該研究采用經典的Nystrom大鼠脊髓背側壓迫損傷模型,在脊髓損傷后多個時間點取材、收集標本,運用RT-PCR、Western-blot以及免疫組化技術分析脊髓損傷后局部MCP-1、MIP-1β的表達與分布、單核/巨噬細胞的浸潤等變化規(guī)律.進而采和干擾RNA技術,構建反義MCP-1基因siRNA-pSilencer-MCP-1質粒、反義MIP-1β基因siRNA-pSilencer-MIP-1β質粒,并酶切鑒定.培養(yǎng)新生大鼠的星形膠質細
2、胞,觀察在前炎細胞因子TNF-α刺激下星形膠質細胞在兩個反義基因質粒轉染前后MCP-1、MIP-1β分子與蛋白水平的變化,以探討反義基因的作用效果.最后,將反義基因質粒通過蛛網膜下腔置管注入到脊髓損傷部位,運用免疫組織化學的方法半定量分析反義基因治療前后SCI早期MCP-1、MIP-1β陽性細胞以及單核/巨噬細胞的變化規(guī)律,觀察反義基因治療對殘存神經元數(shù)目的影響.總之,該研究運用當前先進的干擾RNA技術構建了反義MCP-1、MIP-1β
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