1、目的：本研究利用經(jīng)典的新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)動物模型，觀察HIBD前后神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化、神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度及Tau蛋白水平的改變，探討新生大鼠HIBD早期Tau蛋白表達變化與腦損傷及細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 方法：清潔級7日齡Wistar大鼠82只，隨機分成假手術(shù)組(對照組，n=40)和缺氧缺血性腦損傷模型組(HIBD組，n=42)。參照Rice法單側(cè)結(jié)扎新生大鼠左頸總

2、動脈復(fù)制HIBD動物模型；假手術(shù)組(對照組)只切開頸部正中皮膚，分離但不結(jié)扎左側(cè)頸總動脈；HIBD組及對照組大鼠置入低氧環(huán)境缺氧2小時，而后按時間隨機分為3h、6h、12h、24h、48h組(n=8)。HE及嗜銀染色后，光鏡下觀察。HIBD前后及不同時間組新生大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞的病理變化；原位切口末端標(biāo)記的方法(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTP-biotininsitunick

3、endlabeling，TUNEL)檢測各組腦室周圍白質(zhì)與皮層凋亡細(xì)胞，免疫組織化學(xué)法測各組大鼠腦室周圍白質(zhì)與皮層微管相關(guān)蛋白Tau水平的動態(tài)變化情況，400倍視野下利用計算機圖象分析系統(tǒng)進行神經(jīng)細(xì)胞凋亡個數(shù)計數(shù)及Tau蛋白平均光密度值(averageopticaldensity，OD)測定，并統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果：HIBD模型制作過程中2只新生鼠死亡，其余大鼠行為學(xué)發(fā)生變化；HIBD新生大鼠腦HE病理檢測示神經(jīng)細(xì)胞減少，少數(shù)神經(jīng)

4、細(xì)胞收縮變性、核固縮，可見凋亡小體；HIBD新生大鼠腦嗜銀染色示腦室周圍白質(zhì)及皮層神經(jīng)細(xì)胞中存在神經(jīng)原纖維的增粗、纏繞。TUNEL法染色，凋亡細(xì)胞核呈棕黃色。腦室周圍白質(zhì)與皮層對照組凋亡陽性細(xì)胞極少，與對照組比較HIBD組12小時凋亡細(xì)胞數(shù)增加(p＜0.05)，24小時達高峰(p＜0.01)，48小時凋亡細(xì)胞較24小時組有所減少，但仍高于對照組(p＜0.05)；對照組不同時間點組內(nèi)對比凋亡細(xì)胞數(shù)差異無顯著性(p＞0.05)，HIBD組不

5、同時間點組內(nèi)對比，3小時與12小時、24小時、48小時凋亡細(xì)胞數(shù)差異有顯著性，6小時與24小時、48小時凋亡細(xì)胞數(shù)差異有顯著性，其余組內(nèi)對比無顯著性差異。各實驗組腦室周圍白質(zhì)與皮層Tau蛋白隨著缺血時間的延長而表達增強，其中HIBD組3小時后OD值較對照組略有增加，無顯著性差異(p＞0.05)；6小時、12小時、24小時后OD值逐漸增加，24小時達高峰，與對照組比有顯著性差異(P＜0.05)，陽性染色強度較對照組均明顯增強；48小時組O

6、D值較24小時組略有減少，與對照組比仍有顯著性差異(P＜0.05)。對照組不同時間點區(qū)組內(nèi)對比Tau蛋白OD值差異無顯著性(P＞0.05)，HIBD組不同時間點區(qū)組內(nèi)對比，3小時組與12小時、24小時、48小時組凋亡細(xì)胞數(shù)差異有顯著性(P＜0.05)，其余組內(nèi)對比無顯著性差異。 結(jié)論：7日齡大鼠HIBD早期腦損傷導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞骨架破壞、神經(jīng)原纖維增粗纏結(jié)；7日齡大鼠HIBD早期大腦皮層和腦室周圍白質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡個數(shù)12小時開始增加