1、[目的]
　　 從整體、細(xì)胞及分子水平，研究中藥筋脈通對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡的作用，以及筋脈通含藥血清對高糖培養(yǎng)雪旺細(xì)胞氧化應(yīng)激及其凋亡的影響。
　　 [方法]
　　 1.整體實驗
　　 將SD雄性大鼠隨機分為正常組和造模組；用鏈脲佐菌素（STZ，60mg/kg）一次性腹腔內(nèi)注射SD大鼠的方法制作糖尿病模型。糖尿病模型成功后再隨機分為模型組、筋脈通小、中、大劑量組和維生素C組，每組14只。

2、筋脈通小、中、大組分別按成人劑量5倍、10倍和20倍給藥；VC組按成人劑量10倍給藥。模型組和正常組予灌服蒸餾水。所有實驗大鼠灌胃16w處死。檢測各組治療前及治療后4w、8w、12w和16w的體重和血糖變化；處死前測定大鼠的機械痛閾值；應(yīng)用免疫組化法和實時熒光定量PCR法檢測大鼠坐骨神經(jīng)NADPH氧化酶phox p22亞基、iNOS、Bc1-2及Caspase-3的表達(dá)。
　　 2.細(xì)胞實驗
　　 體外培養(yǎng)雪旺細(xì)胞，S-

3、100蛋白進(jìn)行鑒定。取第3代雪旺細(xì)胞，加入DMEM、50mmolGlu培養(yǎng)液以及含50mmo1Glu的筋脈通（JMT）和維生素C（VC）含藥血清進(jìn)行培養(yǎng)；采用TUNEL法測定各組雪旺細(xì)胞凋亡的情況；應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微技術(shù)和實時熒光定量PCR法檢測NADPH氧化酶phox p22亞基、iNOS、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)水平的變化。
　　 [結(jié)果]
　　 1.整體實驗
　　 （1）血糖和體重
　　

4、 造模前各組體重?zé)o明顯差異（P>0.05）。造模成功后，模型組及各治療組大鼠血糖顯著高于正常組（P<0.01）；模型組及治療組間比較，大鼠4周、8周、12周、16周血糖均無明顯差異（P>0.05）。模型組及各治療組大鼠4周、8周、12周、16周體重顯著低于正常組（P<0.01）；模型組及治療組間比較，大鼠4周、8周、12周、16周體重均無明顯差異（P>0.05）。
　　 （2）機械痛閾值檢測：
　　 與正常組相比，模型

5、組、筋脈通大、小劑量組、VC組機械痛閾值顯著降低（P<0.01）；筋脈通中劑量組無明顯降低（P>0.05）。與模型組相比，各治療組的痛閾值顯著升高（P<0.01）。與維生素C組相比，筋脈通中劑量組痛閾值有顯著升高（P<0.01）。筋脈通各劑量組間比較，筋脈通中劑量組痛閾值升高最明顯（P<0.0）。
　　 （3）坐骨神經(jīng)NADPH氧化酶phox p22亞基表達(dá)
　　 模型組p22亞基的積分光密度值較正常組顯著升高（P<0.

6、01）。各治療組積分光密度值較模型組均有顯著下降（P<0.01）。筋脈通中劑量組積分光密度值明顯低于筋脈通小劑量組和維生素C組（P<0.05，P<0.01）。
　　 （4）坐骨神經(jīng)NADPH氧化酶phox p22亞基mRNA表達(dá)
　　 模型組p22亞基mRNA值較正常組顯著升高（P<0.01）。與模型組相比，筋脈通大、中、小劑量組的mRNA值均有明顯下降（P<0.01，P<0.01，P<0.05），維生素C組下降不明顯（

7、P>0.05）。與維生素C組相比，筋脈通小、中劑量組的p22亞基mRNA值明顯下調(diào)（P<0.05，P<0.01）。
　　 （5）坐骨神經(jīng)iNOS表達(dá)
　　 模型組iNOS積分光密度值較正常組顯著升高（P<0.01）。各治療組積分光密度值較模型組均有顯著降低（P<0.01）。筋脈通中劑量組的積分光密度值明顯低于筋脈通小劑量組和維生素C組（P<0.01）。
　　 （6）坐骨神經(jīng)Bcl-2表達(dá)
　　 模型組和各

8、治療組的Bcl-2積分光密度值較正常組顯著下降（P<0.01）。筋脈通小、中劑量組積分光密度值較模型組均有顯著增高（P<0.01）。筋脈通中劑量組的積分光密度值明顯高于維生素C組（P<0.01）。
　　 （7）坐骨神經(jīng)Bcl-2 mRNA表達(dá)
　　 模型組的Bcl-2 mRNA值均較正常組顯著降低（P<0.01）。與模型組相比，筋脈通大、中、小劑量組的Bcl-2 mRNA值均有明顯上調(diào)（P<0.01），維生素C組上調(diào)不顯

9、著（P>0.05）。與維生素C組相比，筋脈通大、中、小劑量組的Bcl-2mRNA值明顯增高（P<0.01）。
　　 （8）坐骨神經(jīng)Caspase-3表達(dá)
　　 模型組的Caspase-3積分光密度值較正常組顯著增高（P<0.01）。筋脈通中、大劑量組積分光密度值較模型組均有顯著降低（P<0.01，P<0.05）。筋脈通中劑量組的積分光密度值明顯低于筋脈通小劑量組和維生素C組（P<0.05，P<0.01）。
　　

10、（9）坐骨神經(jīng)Caspase-3 mRNA表達(dá)
　　 模型組的Caspase-3 mRNA值較正常組顯著升高（P<0.01）。與模型組相比，筋脈通大、中、小劑量組mRNA值均有明顯下調(diào)（P<0.01，P<0.01，P<0.05）。與維生素C組相比，筋脈通中劑量組的Caspase-3 mRNA值明顯下降（P<0.05）。
　　 2.細(xì)胞實驗
　　 （1）NADPH氧化酶phox p22亞基mRNA表達(dá)
　　

11、 ①Glu組雪旺細(xì)胞p22亞基mRNA表達(dá)水平較正常組明顯升高（P<0.01）。②與Glu組相比，JMT組雪旺細(xì)胞mRNA表達(dá)水平明顯降低（P<0.01）。③JMT組雪旺細(xì)胞p22亞基mRNA表達(dá)水平顯著低于VC組（P<0.01）。
　　 （2）SC中iNOS表達(dá)
　　 ①Glu組及治療組雪旺細(xì)胞iNOS的熒光強度值較正常組明顯升高（P<0.01）。②與Glu組相比，JMT組與VC組雪旺細(xì)胞iNOS的熒光強度值明顯降低（

12、P<0.01）。③JMT組的熒光強度值要明顯低于VC組（P<0.01）。
　　 （3）SC中Bcl-2表達(dá)
　　 ①Glu組雪旺細(xì)胞Bcl-2的熒光強度值較正常組明顯降低（P<0.01）。②與Glu組相比，JMT組雪旺細(xì)胞Bcl-2的熒光強度值明顯升高（P<0.01），VC組升高不明顯（P>0.05）。@JMT組Bcl-2mRNA值顯著高于vC組（P<0.01）。
　　 （4）Bcl-2 mRNA表達(dá)
　　

13、 ①Glu組雪旺細(xì)胞Bcl-2 mRNA表達(dá)水平較正常組明顯降低（P<0.01）。②與Glu組相比，JMT組與VC組雪旺細(xì)胞Bcl-2-mRNA表達(dá)水平均增高（P<0.01）。③JMT組雪旺細(xì)胞Bcl-2 mRNA表達(dá)水平高于VC組（P<0.05）。
　　 （5）SC中Caspase-3表達(dá)
　　 ①Glu組雪旺細(xì)胞Caspase-3的熒光強度值較正常組明顯升高（P<0.01）。②與Glu組相比，JMT組與VC組雪旺細(xì)

14、胞Caspase-3的熒光強度值明顯降低（P<0.01）。③JML組的熒光強度值要明顯低于VC組（P<0.01）。
　　 （6）Caspase-3 mRNA表達(dá)
　　 ①Glu組雪旺細(xì)胞Caspase-3mRNA表達(dá)水平較正常組明顯升高（P<0.01）。②與Glu組相比，JMT組與VC組雪旺細(xì)胞Caspase-3 mRNA表達(dá)水平明顯降低（P<0.01）。③JMT組雪旺細(xì)胞Caspase-3 mRNA表達(dá)水平低于VC組（

15、P<0.01）。
　　 （7）雪旺細(xì)胞凋亡百分率
　　 ①正常組未見雪旺細(xì)胞凋亡。②Glu組及其各治療組雪旺細(xì)胞凋亡明顯增加（P<0.01）。③與Glu相比，JMT組雪旺細(xì)胞的凋亡百分率明顯降低（P<0.01），VC組降低不明顯（P>0.05）。④JMT組雪旺細(xì)胞的凋亡百分率明顯低于VC組（P<0.01）。
　　 [結(jié)論]
　　 1.整體實驗
　　 （1）空腹單次腹腔注射STZ60mg/kg后16

16、周DPN模型建立，檢測DM組大鼠機械痛閾值顯著降低，證實DPN模型成功；筋脈通干預(yù)后顯著提高DM大鼠的機械痛閾值。（2）DM大鼠坐骨神經(jīng)NADPH氧化酶phox p22亞基、iNOS表達(dá)顯著升高。（3）筋脈通能顯著降低DM大鼠坐骨神經(jīng)NADPH氧化酶p22亞基和iNOS的表達(dá)，優(yōu)于維生素C。（4）DM大鼠坐骨神經(jīng)Bcl-2表達(dá)降低，Caspase-3表達(dá)顯著升高。（5）筋脈通干預(yù)后，坐骨神經(jīng)Bcl-2表達(dá)明顯升高，Caspase-3表達(dá)

17、顯著降低，優(yōu)于維生素C。
　　 2.細(xì)胞實驗
　　 （1）采用組織貼塊法原代培養(yǎng)，經(jīng)差速貼壁法+低濃度胰蛋白酶消化法+G418純化的Wistar乳鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞，并經(jīng)S-100蛋白免疫組化鑒定，純度可達(dá)90％左右，成功建立SC原代模型。（2）高糖培養(yǎng)環(huán)境下雪旺細(xì)胞NADPH氧化酶p22亞基和iNOS表達(dá)增高。（3）高糖環(huán)境培養(yǎng)下SC凋亡百分率明顯增加，Bcl-2表達(dá)降低，而Casase-3表達(dá)顯著升高。（4）筋脈通含