1、剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種專性細胞內(nèi)寄生的機會性致病原蟲,其生活史及致病機理復雜,人類對弓形蟲普遍易感,孕婦感染弓形蟲后可導致胎兒先天性弓形蟲病,嚴重可致畸胎,死胎,在AIDS,惡性腫瘤等免疫力低下患者中,弓形蟲作為一種機會性感染因子,是引發(fā)致死的病因之一。目前尚無有效治療弓形蟲病的藥物。因此,弓形蟲病的預防尤為重要。
　　 對弓形蟲疫苗的研究經(jīng)歷了死疫苗、減毒活疫苗、基因工程疫苗以及DNA疫苗,DN

2、A疫苗可同時誘導細胞免疫和體液免疫,但其誘導免疫反應的效率相對較低,尤其對于大型動物種系和人類。為提高DNA疫苗誘導的免疫反應的強度,構建基因佐劑成為一種替代方法。免疫刺激序列為非甲基化的短核苷酸重復序列,即CpG基序,是目前廣被接受的一種基因佐劑,CpG基序在細菌,病毒的DNA中普遍存在,研究表明,人工合成的非甲基化CpG基序同樣能通過To11樣受體9直接活化B細胞,誘導其增殖并抑制其凋亡,并能促進免疫球蛋白和IL-6,IL-10,I

3、L-12等細胞因子分泌。在寄生蟲等感染性疾病中,CpG序列可在動物體內(nèi)激發(fā)強烈的Th1型相關反應,在寄生蟲病預防的研究中,CpG的應用也不乏成功的例子。由于質(zhì)粒DNA分為兩個明顯的功能單位,一個是轉錄單元指導抗原表達,一個是DNA骨架中的佐劑單元(CpG基序),誘導免疫反應激活。在質(zhì)粒DNA骨架中適量增加CpG基序數(shù)量,可增強DNA疫苗的免疫效應。
　　 SAG1抗原作為弓形蟲速殖子期特異的主要表面抗原之一,具有高度的免疫原性和

4、免疫保護性,是弓形蟲感染免疫診斷和疫苗開發(fā)的的主要候選抗原。SAG1蛋白分布于弓形蟲速殖子表膜、速殖子內(nèi)以及納蟲泡的管狀結構中,約占弓形蟲體總蛋白的3-5％,卻可抑制患者血清中抗體活性的50％,是誘導宿主免疫應答的主要靶抗原。ROP2蛋白是弓形蟲棒狀體分泌的一種蛋白,主要協(xié)助蟲體入侵宿主細胞,在弓形蟲生活史的速殖子期、緩殖子期和子孢子期中均有表達,具有高度的保守性和免疫原性。SAG1和ROP2在蟲體入侵宿主細胞的過程中有相互促進作用,其

5、相應的抗體可有效拮抗弓形蟲的感染。
　　 本研究根據(jù)已報道對小鼠有免疫刺激作用的免疫刺激序列,設計并合成一段含三對免疫刺激序列的核苷酸,作為內(nèi)源性佐劑插入質(zhì)粒pcDNA3.1中,構建質(zhì)粒pcDNh3.1/GpG作為DNA疫苗載體,再與弓形蟲抗原基因片段SAG1-ROP2相連,以重組質(zhì)粒肌肉注射免疫小鼠,觀察基因疫苗與佐劑的免疫效果。結果表明,增加CpG基序的基因疫苗的免疫效果優(yōu)于對照組,且以細胞免疫為主。CpG基序作為內(nèi)源性佐劑