1、分類(lèi)號(hào)：學(xué)號(hào)：2010002惻必掣必必泰山匡虧陀川IIUIIIIIIIIIII』WF2809025論文題目：Apelin一13對(duì)體外培養(yǎng)新生大鼠皮層神經(jīng)元氧糖剝奪誘導(dǎo)凋亡的抑制作用及機(jī)制探討作者姓名：武菲學(xué)科、專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)學(xué)位類(lèi)型：科學(xué)學(xué)位型研究方向：中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷與修復(fù)指導(dǎo)教師：張秋玲教授入學(xué)時(shí)間：2010年9月論文工作起止時(shí)間：2011年9月。2013年4月～◎Apelin一13對(duì)體外培養(yǎng)新生大鼠皮層神經(jīng)元氧糖剝奪誘導(dǎo)凋亡的抑

2、制作用及機(jī)制探討研究生：武菲專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)導(dǎo)師：張秋玲教授中文摘要目的通過(guò)自制氧糖剝奪(oxygen—glucosedeprivation，OGD)模型誘導(dǎo)體外培養(yǎng)新生大鼠皮層神經(jīng)元凋亡的方法，觀察apelin一13對(duì)氧糖剝奪誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡的抑制作用、促進(jìn)神經(jīng)元存活的保護(hù)作用以及對(duì)環(huán)腺苷酸(cyclicadenosinemonophosphate，cAMP)／蛋白激酶A(proteinkinaseA，PKA)／c伽汩反應(yīng)元件結(jié)合蛋t芻

3、(cAMPresponsiveelementbindingprotein，CP也B)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性的影響，探討apelin一13對(duì)氧糖剝奪誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡抑制作用的相關(guān)機(jī)制，以期為缺血性腦卒中的治療提供實(shí)驗(yàn)方法和理論依據(jù)。方法1新生大鼠原代皮層神經(jīng)元培養(yǎng)并純化，經(jīng)神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuronspecificenolase，NSE)免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，計(jì)算純度。2建立原代培養(yǎng)神經(jīng)元氧糖剝奪模型，并驗(yàn)證其有效性：原代神經(jīng)元培養(yǎng)至第7天換

4、無(wú)糖Earle’S液培養(yǎng)，并覆蓋滅菌液體石蠟(氧糖剝奪模型)，于培養(yǎng)第6、9、12、24、30h不同時(shí)間點(diǎn)，分別進(jìn)行倒置顯微鏡下觀察、微管相關(guān)蛋白2(microtubuleassociatedprotein一2，MAP2)熒光染色、乳酸脫氫酶(1actatedehydrogenase，LDH)釋放量檢測(cè)、原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TdTmediateddUTPNickEndLabeling，Tunel)檢測(cè)凋亡細(xì)胞，通過(guò)上述方法驗(yàn)證模型有效

5、性，并篩選出致凋亡率最高的時(shí)間點(diǎn)作為本研究實(shí)驗(yàn)觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)。3確定apelin13是否能對(duì)體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元氧糖剝奪誘導(dǎo)的凋亡具有抑制作用：10nmol／L、1nmol／L、O1nmol／L的apelin一13分別預(yù)處理神經(jīng)元30min后，施加OGD損傷，同時(shí)再加入上述濃度apelin13繼續(xù)培養(yǎng)12h，采用倒置顯微鏡下觀察、MAP2熒光染色、LDH檢測(cè)、Tunel和神經(jīng)元特異性核蛋白(NeuronspecificNuclearProte