1、目的：本文研究大鼠脂肪干細胞(adipose-derived stem cellsADSCs)在體外分離培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化成軟骨細胞的能力,初步觀察不同濃度的TGF-β1對其增殖、分化成軟骨細胞的影響,為軟骨組織工程及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：從3周齡SD大鼠腹股溝脂肪墊分離出脂肪組織,通過Ⅰ型膠原酶消化法分離干細胞,接種于含有胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中分離傳代。每日以倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)及生長情況。取第三代脂肪干細胞分

2、成5組,包含1個對照組(培養(yǎng)液為人脂肪干細胞完全培養(yǎng)基:高糖DMEM、10％胎牛血清、50nmol/L抗壞血酸、6.25mg/L胰島素、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素、100nmol/L地塞米松,不含TGF-β1)和4個TGF-β1濃度組(濃度分別是1、10、40、80μg/L加入脂肪干細胞完全培養(yǎng)基)。采用MTT比色法進行分化和增殖活性比較,Ⅱ型膠原免疫細胞化學(xué)染色和細胞甲苯胺藍染色檢測成軟骨細胞分化情況。
　　

3、 結(jié)果：原代細胞接種4-6小時后即可見沉降貼壁,7-8天左右可見大量增殖,按一定方向性排列呈漩渦狀或束狀,傳代后細胞增殖迅速,生長穩(wěn)定。成軟骨誘導(dǎo)后行細胞甲苯胺藍染色示:10μg/LTGF-β1濃度組陽性,40μg/LTGF-β1濃度組和80μg/LTGF-β1濃度染色較淡,染色細胞少,0μg/LTGF-β1濃度組和1μg/LTGF-β1濃度組為陰性。Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色顯示:10μg/L TGF-β1濃度組陽性；40μg/LTGF