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文檔簡介
1、目的:觀察人脂肪基質(zhì)干細(xì)胞(adipose derived stem cells,ADSCs)體外分離培養(yǎng)及成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化的生物學(xué)性狀,探討其作為軟骨組織工程種子細(xì)胞的可行性?! ?方法: ①人脂肪組織來源于健康成年女性腹部吸脂術(shù),酶消化法分離出ADSCs,體外培養(yǎng)擴(kuò)增。 ②取第3代ADSCs,測(cè)細(xì)胞生長曲線,流式細(xì)胞儀測(cè)原代細(xì)胞表面標(biāo)記;成脂和成軟骨誘導(dǎo)分化。 ③倒置顯微鏡觀察,油紅“O”、AB-
2、PAS(阿爾辛藍(lán)-過碘酸)染色和Ⅱ型膠原免疫熒光染色檢測(cè)分化情況:逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)相關(guān)標(biāo)志基因表達(dá)?! ?結(jié)果: ①體外培養(yǎng)的ADSCs細(xì)胞形態(tài)均一,傳代穩(wěn)定。 ②經(jīng)成脂誘導(dǎo),細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡,油紅“O”染色呈紅色,RT-PCR檢測(cè)到有Leptin、PPAR-γ表達(dá):經(jīng)成軟骨導(dǎo),AB-PAS染色呈紫紅色,Ⅱ型膠原免疫熒光染色胞漿呈強(qiáng)陽性,RT-PCR檢測(cè)COLLⅡ、SOX9、aggreca
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