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1、目的:研究軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)支架材料的制備,及其體外復(fù)合同種異體脂肪源性干細(xì)胞構(gòu)建軟骨組織的技術(shù)方法。探討軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)作為支架材料在軟骨組織工程中應(yīng)用的可能性。方法:成年新西蘭大白兔脂肪源性干細(xì)胞獲得,培養(yǎng),擴(kuò)增。成年新西蘭大白兔新鮮軟骨分離獲得,低溫凍干12h,后經(jīng)曲拉通、DNA酶、RNA酶等處理制備成為軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)支架材料,紫外線滅菌后,終濃度為2×107/L的脂肪源性干細(xì)胞種植于軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)中于軟骨細(xì)胞方向誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周,
2、構(gòu)建軟骨組織。新鮮制備的軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)及構(gòu)建的軟骨組織分別行組織學(xué)、免疫組織化學(xué)及透射電鏡檢測(cè)。結(jié)果:組織學(xué)、透射電鏡檢測(cè)示實(shí)驗(yàn)制備的軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)支架材料內(nèi)無細(xì)胞結(jié)構(gòu)存在,僅殘留空白軟骨陷窩。復(fù)合脂肪源性干細(xì)胞后并于軟骨細(xì)胞方向誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周后,細(xì)胞向材料內(nèi)部遷移,粘附,生長(zhǎng)良好。免疫組織化學(xué)顯示部分載體內(nèi)細(xì)胞Ⅱ型膠原免疫組化染色陽性。結(jié)論:軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)可通過凍干,化學(xué)除垢劑,酶消化法制備。復(fù)合同種異體脂肪源性干細(xì)胞并于軟骨細(xì)
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