草魚白細胞介素-2基因克隆、序列分析及其在原核細胞中表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、白細胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）是機體復雜免疫網絡中起調節(jié)作用的關鍵淋巴因子之一,在人和其他高等脊椎動物中已有廣泛的研究與應用,但對低等脊椎動物的IL-2仍知之甚少,魚類在進化上處于連結低等無脊椎動物和高等脊椎動物的關鍵地位,開展魚類IL-2的研究,對了解IL-2的分子起源與進化具有重要意義.該研究用ConA刺激體外培養(yǎng)的草魚頭腎白細胞,MTT法檢測發(fā)現體外誘導的草魚白細胞培養(yǎng)上清液具有促進草魚頭腎淋巴母細胞增殖的

2、作用,觀察到了草魚IL-2活性.在此基礎上,開展了草魚IL-2 cDNA基因克隆、序列分析和原核表達研究.將克隆到pUCm-T質粒上的草魚IL-2 cDNA基因用NcoI和BamHI切下,連接到表達質粒pET28b上,篩選得到的重組質粒轉化E.coli.BL21/DE3,用IPTG誘導表達,做SDS-PAGE分析,發(fā)現在21kD處有特異性的表達產物條帶,分子量與預期的重組IL-2（包括部分His等載體序列）分子量大小一致,表明草魚IL-

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