多基因轉化741楊及其基因表達的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文是在田穎川和鄭鈞寶等研究的轉雙抗蟲基因741楊基礎上,成功的轉化了Ri質粒15834菌株,并以轉雙抗蟲基因741楊和741楊單轉Ri質粒15834菌株為對照,研究多基因的轉化以及初步探討了多基因之間的基因表達。通過rolD基因和MAS基因,NptⅡ基因和BtCry1Ac基因的PCR檢測和外部形態(tài)差異對轉多基因植株進行鑒定,表明多基因共存于轉基因植株中。 1.對轉多基因741楊各株系試管苗的生根率、根長、根量、高生長量及葉片及

2、莖形態(tài)變異進行研究,得出大多數轉多基因741楊表現出Ri質粒轉化植物的典型特征,轉化植株的葉片均在MS0培養(yǎng)基上具有自發(fā)根的特性,形態(tài)表現為葉片皺縮、莖生長量減少,試管苗生根率高,側根極為發(fā)達等特點。98﹪左右轉基因株系的生根率比對照植株都有明顯提高;轉多基因株系的根數量比對照都有增加,根發(fā)達,形成簇生根,多得幾乎無法計數;根長度大多數株系明顯高于對照,有少數的株系與對照植株相似,有部分株系的根長明顯短于對照;多基因轉化741毛白楊后,

3、引起轉化植株葉片增厚,葉面積明顯縮小,葉柄變短,葉面皺縮;莖節(jié)間縮短,苗高生長減少,分枝數量增加,個別株系出現莖彎曲生長,嚴重影響了苗木的正常生長,但是有少量株系的植株出現了正常生長的情況,甚至對生長有一定促進作用。 2.通過HPLC法對轉多基因741楊不同株系的植株葉片的內源激素進行了測定。幾乎所有轉多基因741楊株系中,植株葉片中內源IAA含量均高于轉雙抗蟲基因741楊,植株生長表現越矮小的葉片中IAA含量越高,大部分株系比

4、741楊單轉Ri質粒15834菌株對照含量低。 3.采用ELISA技術,對轉多基因741楊不同株系轉基因苗和毛狀根中Bt毒蛋白進行測定,結果表明Bt毒蛋白在葉片和毛狀根中均有表達,葉片毒蛋白表達量明顯高于毛狀根的。轉多基因苗中不論是其葉片還是毛狀根,其毒蛋白含量大部分株系均比轉雙抗蟲基因741楊的毒蛋白含量低,比單轉Ri質粒15834菌株的含量高。表明轉入發(fā)根農桿菌后,其原來根癌農桿菌毒蛋白表達含量降低了。發(fā)根農桿菌的轉入對根癌

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