草莓高頻再生系統(tǒng)的建立及果聚糖果糖基轉移酶基因轉化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以全明星草莓(Allstar)為試材,建立草莓葉片高頻再生體系,比較了不同因素對草莓葉片再生能力的影響。利用農桿菌LBA4404(pTSB)介導轉化,獲得了草莓轉果聚糖果糖基轉移酶(fructanfructosyltransferase)基因植株,并對影響外植體轉化的因素進行了探討。轉化植株在Km90mg/L生根培養(yǎng)基中生根良好,PCR結果呈陽性,初步證明目的基因已經(jīng)整合到草莓基因組中。抗凍試驗、葉片電導率測定、多糖含量測定的實驗

2、結果證實果聚糖果糖基轉移酶在草莓轉化植株中已實現(xiàn)表達。具體工作如下: (1)草莓組織培養(yǎng)和高頻再生體系的建立。選用草莓葉片和莖段進行組織培養(yǎng)、誘導再生,得到了以葉片為外植體的最適分化培養(yǎng)基為:TDZ1.0mg/L+NAA0.05mg/L+IAA0.2mg/L+GA0.25mg/L,分化率可達81.82﹪;生根培養(yǎng)基為MS0。 (2)在建立了草莓高頻轉化受體系統(tǒng)的基礎上,利用農桿菌LBA4404(pTSB)進行轉化研究。從

3、工程菌的活化狀態(tài)、侵染時間等方面闡述了草莓基因轉化中的影響因素。轉化植株在含Km90mg/L生根培養(yǎng)基中生根良好。PCR檢測表明,轉化植株的條帶和質粒中的目的條帶一致,而未轉化植株沒有擴增出任何條帶,說明外源基因已經(jīng)整合到草莓基因組上。 (3)進行試管苗抗凍試驗,-5℃時轉化植株和未轉化植株的生長狀況表現(xiàn)出較大差異。轉化植株的抗凍能力提高。 (4)對植株的葉片進行電導率測定,在一定低溫范圍內,轉化植株的電導率要明顯低于未

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