1、齲病是危害人類口腔健康最常見的疾病之一，四聯(lián)因素論中牙菌斑生物膜是齲病發(fā)生的始動因子。生態(tài)性菌斑假說認為，牙菌斑中的微生物是人類口腔正常菌群，正常情況下菌叢間的組成處于動態(tài)平衡，當這一微妙平衡受到環(huán)境變化的擾亂，口腔微生態(tài)失調(diào)，具有產(chǎn)酸耐酸特性的潛在致齲菌數(shù)量增多或（和）毒力增強，非致齲性菌斑轉(zhuǎn)變?yōu)橹慢x性菌斑，產(chǎn)生大量致病物質(zhì)，齲病發(fā)生。人類口腔中已檢出的700多種細菌中，一半以上尚未能培養(yǎng)。人類對口腔微生物的認識，經(jīng)歷了從局限于幾種已

2、知致病菌→牙菌斑致病環(huán)境→生物膜結(jié)構(gòu)→生物膜中微生物的復雜性，對生物膜中微生物多樣性與口腔疾病尤其與齲病的關(guān)系認識已成為目前國際口腔微生物研究領域的最新前沿和重點。在已見的有限報道中，都以小樣本的普通開放人群為研究對象。對封閉人群而言，其居住環(huán)境、生活方式、飲食習慣、飲食結(jié)構(gòu)都相對固定一致，仍存在對齲病不同易感表現(xiàn)，這些人群在基線一致的前提下，微生物因素的影響就提到了四聯(lián)因素論中最重要的位置、具有更強的可比性和研究意義。
　　

3、目的：本研究使用人類口腔微生物DNA微陣列（The Human Oral Microbe Identification Microarray，HOMIM）從種、系、型水平對封閉人群中高齲和無齲兒童牙菌斑中微生物細菌群類進行分析，比較封閉人群高齲和無齲兒童、及封閉人群與開放人群之間牙菌斑微生物的定植情況及數(shù)量的多樣性改變，較全面認識微生物多樣性與齲病發(fā)生的關(guān)系，并以熒光實時定量PCR檢測了牙菌斑中幾種公認的齲病相關(guān)細菌，與芯片結(jié)果比較和初

4、步評價。
　　 方法：菌斑樣本分別取自30高齲兒童和20個無齲兒童的第一恒磨牙健康牙面，提取混合菌斑總DNA，行16SrRNA特異性序列片段PCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)熒光素Cy3-dCTP標記后與基于16SrRNA寡核苷酸探針所制備的HOMIM雜交，專用軟件處理數(shù)據(jù)；應用熒光定量PCR（SYBRGreenⅠ）檢測牙菌斑中的變異鏈球菌，口腔鏈球菌，遠緣鏈球菌，乳酸桿菌，內(nèi)氏放線菌。聚類分析、兩獨立樣本秩和檢驗及卡方檢驗等進行統(tǒng)計學分析。<

5、br>　　 結(jié)果：DNA微陣列分析發(fā)現(xiàn)（1）高齲組和無齲組共50名受試者第一恒磨牙菌斑樣本中共檢測到97個微生物種型或類群，分別歸屬于6個門類，35個屬類。高齲組每一個體菌斑樣本中微生物種型或類群的數(shù)量（中位數(shù)為30）低于無齲組（中位數(shù)為39）（P<0.05）。（2）一些菌屬和細菌在無齲組中的檢出率或數(shù)量高于高齲組，如擬桿菌屬、生痰二氧化碳噬纖維菌、紅棕色單胞菌屬、嗜血桿菌、纖細彎曲桿菌、昭和彎曲桿菌、淺黃奈瑟氏菌、戈登鏈球菌、血鏈球

6、菌、戈氏放線菌。（3）變異鏈球菌、遠緣鏈球菌在高齲和無齲組中均無檢出，內(nèi)氏放線菌僅在無齲組中檢出1例，乳桿菌僅在高齲組中檢出1例。（4）開放人群比封閉人群多檢出3個門2個屬：脫鐵桿菌門（Deferribacteres）：互養(yǎng)菌屬（Synergistetes[G-3]）、螺旋體門（Spirochaetes）：密螺旋體屬（Treponema）、SR1門；（5）高齲兒童群體：普雷沃氏菌屬（Prevotella）、優(yōu)桿菌屬、口金氏菌、脫氮金氏菌

7、、戈氏放線菌、戈登鏈球菌、澳大利亞鏈球菌、戈氏放線菌、內(nèi)氏放線菌、小韋榮氏球菌、生痰月形單胞菌等在開放人群中的檢出率（100％，100％，60％，70％，90％，90％，60％，60％，100％，70％）高于封閉人群（53.3％，26.7％，13.3％，13.3％，33.3％，40％，0，0，40％，20％）（P<0.05）；澳大利亞鏈球菌、兒童鏈球菌、戈氏放線菌、生痰二氧化碳嗜纖維菌、普雷沃氏菌屬、彎曲桿菌屬、韋榮球菌屬、嗜血桿菌屬等

8、檢出量亦均高于封閉人群（P<0.05）。（6）無齲兒童群體：優(yōu)桿菌屬、黃褐二氧化碳嗜纖維菌、嗜糖普雷沃菌、口金氏菌、奈瑟氏菌、砂真桿菌、有害月形單胞菌、血孿生球菌等在開放人群的檢出率（100％，60％，50％，70％，70％，90％，80％，70％）高于封閉人群（30％，0，0，0，0，30％，20％，10％）（P<0.05）。而直形彎曲菌在開放人群的檢出率（20％）低于封閉人群（90％）（P<0.05）；口腔鏈球菌、內(nèi)氏放線菌、二氧化

9、碳噬纖維菌屬、新月形單胞菌屬、普雷沃氏菌屬、彎曲桿菌屬等在開放人群的檢出量亦高于封閉人群（P<0.05），而開放人群中鏈球菌屬的檢出量低于封閉人群（P<0.05）。（7）產(chǎn)黑素普雷沃氏菌、嗜血桿菌、澳大利亞鏈球菌在開放人群高齲組的檢出量高于無齲組（P<0.05），但在封閉人群無齲組檢出量卻高于高齲組（P<0.05）。（8）實時熒光定量PCR：所有樣本均有變異鏈球菌、乳酸桿菌、內(nèi)氏放線菌、遠緣鏈球菌和口腔鏈球菌的檢出，其中變異鏈球菌、乳酸

10、桿菌和內(nèi)氏放線菌在無齲組中數(shù)量高于高齲組，而遠緣鏈球菌和口腔鏈球菌在高齲組中的數(shù)量多于無齲組，但所有其差異均無統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：封閉人群兒童牙菌斑的微生物多樣性（類和量）低于開放人群，其中與齲病發(fā)生相關(guān)的微生物種系型分布與開放人群比較亦有很大差異，一些與開放人群齲病發(fā)生相關(guān)的細菌在封閉人群可能成為有益菌，如產(chǎn)黑素普雷沃氏菌、嗜血桿菌和澳大利亞鏈球菌。高齲狀態(tài)下菌斑微生物種類減少、結(jié)構(gòu)比例改變，而在齲病發(fā)生階段，可能不需要